PCR反应所需要的时间的影响因素

模块升温和降温时间、模块与PCR管内温度平衡时间、延伸时间以及循环次数这四个因素决定了在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间。

1、延伸时间

PCR产物的长度和DNA聚合酶的合成速度会对延伸时间产生影响。若PCR产物长度不足100bp时，则可以考虑将延伸时间变为0。常用的方法还有采用高速的DNA聚合酶，但是，高速的DNA聚合酶并不是对所有PCR实验都适用。

2、循环次数

模板量及检测要求会对循环次数产生影响。整合高速DNA聚合酶、超薄管（或特殊贴附技术）以及快速PCR仪使得CR反应在较短的时间内完成，就是快速PCR技术

3、模块升温和降温度时间

升降温速度通常会在PCR仪上被标明，然而，大多数PCR仪标的是Zda变温速度，即是瞬间达到的速度。仅有很少的PCR仪标的是和实验相关的平均升降温速度

4.模块与PCR管内温度平衡时间

由于铝块的导热能力要强于塑料和水许多，所以当模块温度达到后，PCR管内的温度还远没有达到，使二者达到平衡需要一定的时间。想要使这一时间减少，有以下四种方法：

（1）使模块温度过冲，在管内温度快达到时降到目标温度，然而如果过冲的温度太高会导致实际温度过冲，会对PCR反应结果产生影响。

（2）使PCR反应液的体积减少，然而若体积变小则会降低PCR反应的可靠性。

（3）使PCR管的厚度降低，然而若太薄则强度不够。

（4）使PCR管与模块贴附程度增加。