分子杂交探针制备方法

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

探针制备方法：

1.切口平移法

探针类型：双链DNA

标记类型：放射性和非放射性探针

原理：从双链切口利用Klenow酶的5’-3’外切酶和DNA聚合酶活性使DNA探针合成。

特点：具有较低的灵敏度，简便迅速

2.末端标记法

探针类型：DNA和RNA探针

标记类型：放射性探针

原理：在探针的5’端利用T4核苷酸激酶标记[Y-32P]ATP。

特点：具有很高的灵敏度，和内标探针相比更加的稳定。

3.体外转录法：

探针类型：单链DNA或者RNA探针

标记类型：放射性和非放射性探针

原理：将单链或者变性靶核酸作为模板，使用逆转录酶或者RNA聚合酶使双链探针体外合成，然后再通过没解处理使单链探针得到。

特点：具有很高的灵敏度

4.随机引物法

探针类型：双链DNA

标记类型：放射性和非放射性探针

原理：将变性的靶DNA作为模板，通过随机的八碱基引物使DNA探针体外合成。

特点：具有比较低的灵敏度，简便迅速

5.PCR掺入法

探针类型：双链DNA

标记类型：放射性和非放射性探针

原理：通过PCR使DNA探针合成。

特点：需要将引物合成，具有较高的灵敏度，模板不受限制。

6.末端转移法

探针类型：双链或单链DNA

标记类型：放射性和非放射性探针

原理：在双链或者单链的DNA探针的3’-OH上利用DNA末端转移酶链接核苷酸。

特点：需要TDT酶，简便迅速。