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二氧化碳培养箱工作原理
二氧化碳培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器。也是是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,它广泛应用于微生物、农业科学、YL实验的研究和生产。
二氧化碳培养箱基本工作原理
水套式二氧化碳培养箱的温度是通过电热丝给水套内的水加热,再通过箱内温度传感器来检测温度变化,使箱内的温度恒定在设置温度。气套式二氧化碳培养箱的加热是通过遍布箱体气套层内的加热器直接对内箱体进行加热的,又叫六面直接加热。
气套式二氧化碳培养箱与水套式二氧化碳培养箱相比,具有加热快,温度的恢复比水套式培养箱迅速的特点,特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。箱内温度一般设定在37℃±0.2℃左右。
二氧化碳培养箱控制二氧化碳的浓度是通过二氧化碳浓度传感器来进行的。二氧化碳传感器用来检测箱体内二氧化碳浓度,将检测结果传递给控制电路及电磁阀等控制器件,如果检测到箱内二氧化碳浓度偏低,则电磁阀打开,二氧化碳进入箱体内,直到二氧化碳浓度达到所设置浓度,此时电磁阀关闭,箱内二氧化碳切断,达到稳定状态。二氧化碳采样器将箱内二氧化碳和空气混合后的气体取样到机器外部面板的采样口,以随时用二氧化碳浓度测定仪来检测二氧化碳的浓度是否达到要求。
目前大多数的二氧化碳培养箱是通过增湿盘的蒸发作用产生湿气的(其产生的相对湿度水平可达95%左右,但开门后湿度恢复速度很慢)。因为湿度蒸发面积越大,越容易达到Zda相对饱和湿度并且开关门后的湿度恢复的时间越短。所以湿度蒸发面积大的培养箱较湿度蒸发面积小的培养箱容易保持Zda相对饱和湿度。
二氧化碳培养箱的特点
1、占用空间小
二氧化碳培养箱采用大屏幕液晶显示,多组数据一屏显示,菜单式操作界面,简单易懂,便于操作。二氧化碳培养箱占用空间小,可堆叠放置(二层),微电脑控制器,控制精确、可靠不锈钢内胆与隔板,四角半圆弧过渡,搁板支架可以自由装卸,便于工作室的清洗。
2、污染防止
可对箱门进行加热从而使内玻璃升温,有效防止玻璃门产生冷凝水,防止由于玻璃门冷凝水带来微生物污染的可能性。
3、微生物GX过滤
CO2进气口配备GX微生物过滤器,针对直径大于等于0.3um的颗粒,过滤效率高达99.99%,有效过滤CO2气体中细菌及灰尘颗粒。
4、CO2浓度恢复速度
红外传感器CO2浓度的监测是不受温度和湿度的影响的,在实验过程中需要频繁打开箱门时,红外传感器是不错的选择。如开门30秒后关门,它可以在小于10分钟内恢复到37℃的设定温度,在小于5分钾内恢复到5%设定CO2浓度,即使在多人使用,需频繁开门、关门的情况下,仍能保持箱内CO2浓度的稳定和均匀。
二氧化碳培养箱的作用
1、二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供Z精确稳定的控制,以便于其研究工作的进展;
2、二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范,并且能够定期消除污染,以保护研究成果,防止样品损失。
二氧化碳培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。
二氧化碳培养箱使用方法
1、二氧化碳培养箱应安装在空气干净、无日光直射、无强电磁场及辐射能量,周围温差变化较小的室内。为保证二氧化碳培养箱控温精度,建议在15~25℃的环境下使用。
2、二氧化碳培养箱开机前应熟读使用说明书,掌握正确的使用方法,特别注意钢瓶开启前,一定要拧松减压阀,防止输气胶管爆破。
3、当环境温度与设定温度差小于5℃时,应用空调降低周围环境温度,在培养的全过程中,应保持环境温度没有明显的变化,否则因环境温度的变化,引起二氧化碳培养箱内控温不准。
4、使用中应经常监视减压阀输出压力及两个流量计的流量,切不可随意拧动控制箱内的各类阀门。若二氧化碳培养箱内浓度有偏差,应先找出各相关数值不准的原因,才能略为调整。
5、钢瓶压力不足1MPa时应及时更换,更换钢瓶时,应先将钢瓶开关关闭,拧松减压阀螺轴,再拆下减压阀重新安装在新的钢瓶上。
6、在打开二氧化碳培养箱内门时,应先关闭二氧化碳控制开关,关门后,待CO2浓度显示屏显示“0.0”时,再打开CO2控制开关。
7、在打开玻璃门时,应按使用方法3进行操作,防止箱内温度和CO2浓度恢复时因累计而产生“过冲”现象。
8、在首次使用二氧化碳培养箱或长期不用后重新使用二氧化碳培养箱时,均应按使用方法第1条至第3条要求操作,尤其在正式培养时应做污染检查。
9、二氧化碳培养箱应有良好的接地装置,以保证安全。
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二氧化碳培养箱的校准
二氧化碳培养箱是进行组织、细胞、细菌培养的一种仪器。它是进行科学研究必不可少的重要设备。为了保证实验数据和实验结果的准确,就必须经常测量和校准CO2培养箱内的浓度,以确保实际浓度与设定浓度的一致性。
二氧化碳培养箱的安装
由于CO2培养箱无制冷功能,在我国南方当气温超过培养温度时,会使箱温升高。所以,安装CO2培养箱的房间Z好安装空调机。
对于电源的配置,因这类设备的电子控制系统中多属线性器件,抗干扰能力较强,加之各直流供电单元均设有稳压电路。故在电源配置时除满足电压和容量外,无特殊要求。在电网电压波动超过10%的情况下,不必配置稳压设备。
二氧化碳培养箱的校准
由于CO2培养箱受使用环境和条件的影响较大,许多厂家在产品设计上仍保留用户重新校准的部件,一般是在面板上设有校准和调零微调。无论哪种类型的产品,校准工作都应在箱内的温度和湿度稳定之后进行。
1、温度校准:
有的产品在出厂前已完成温度校准工作,校准部件均安装在箱内的控制板上,用户不宜再作调整。对于面板上有校准微调的产品,可在接近培养温度下(如37℃),取一根精密温度计置于箱内,待温度稳定后观察温度计指示值,如与显示值不跗,调整微调使其相附即可。
温度的校准步骤:
①在培养箱内放置一个准确的玻璃管式水银温度计,以校准所设定温度。同时,再放置一个准确的体温计,以校准极限温度。
②把温度旋钮调到所需温度37℃。
③把极限温度旋钮调到Zda。等待24小时,让机器达到稳定。
④如果温度还没达到37℃,再调整温度旋钮到37℃,然后再等待24小时,让机器Z后达到稳定。
⑤当培养箱稳定在37℃后,按逆时针方向转动极限温度旋钮,直到该极限温度旋钮的指示灯明亮为止。
⑥再小心地把极限温度旋钮顺时针方向转动,直到指示灯刚好熄灭为止。
注意:机器正常运转期间,其极限温度指示灯应保持熄灭状态。当箱内温度高于极限温度时,该指示灯点亮报警。如果面板液晶显示温度与箱内温度计读数不符,可进一步调整校准。首先,调整显示器点,直到读数与水银温度计的读数相吻合,然后,等待数小时,让机器稳定。如果还不相符,可重复上一步骤,直到机器达到Z终稳定。
2、CO2浓度校准:
先进行零点校准。在CO2培养箱的气体条件中,一般是以空气中的CO2浓度为零点的,故在箱内充满新鲜空气时的显示值应为0。校准时先断开气源,打开箱门数分钟后再关闭,待温、湿度稳定后两整调零微调使显示值为0。
CO2浓度校准一般采用气体分析法和标准气体法两种方法。前者是通过面板上的气体采样孔采取箱内气体样品,经分析获得CO2实际浓度,再校正显示值;后者是将已知CO2浓度的标准气体充人箱内,再校正显示值。
对比之下,气体分析法成本较低,但需具备气体分析条件或进有关部门检验;标准气体法较为方便,但购买标准气价格较贵。校准时应注意,零点校准与浓度枝准相互有一定影响,所以这两项校准应反复进行至少三次。
CO2浓度的设定和校准步骤:
(1)CO2浓度零位的调整
①排除完箱内CO2,使培养箱在所设定的温度37℃下达到稳定。
②用一把小螺丝刀调整零位调节器(Zero),直到CO2显示读数为0.0。
③关闭箱门,稳定一个小时。
④再调整零位调节器(Zero),直到CO2显示读数为0.1,以达到正常环境中CO2含量。
(2)CO2跨程调节器
①把CO2供气管道与培养箱接通,并把CO2气瓶上的压力调节器调至0.1~0.2MPa。
②按下Push to Read Set Point键,不要松开,同时调Turn to Set CO2 Set Point旋钮,直到显示出的读数比实际需要(5%)低2%,即调至3%。
③等待一小时,让培养箱达到稳定。用CO2浓度检测仪检测CO2浓度。
④若不吻合,用一把小螺丝刀调整CO2 Span Adjustment,使得CO2显示浓度与CO2浓度检测仪读数相吻合。
⑤按②步骤操作,将CO2显示浓度调至4%。
⑥重复步骤④、⑤,使得CO2显示浓度与CO2浓度检测仪读数相吻合。
⑦将CO2显示浓度调至5%,等待一个小时,让培养箱达到稳定,用CO2浓度检测仪检测CO2浓度,以保证机器显示读数与测定浓度相符。
二氧化碳培养箱使用和维护
1、箱温和门温的设定:
为确保温度控制精度和避免超温,多数产品的箱温均采用双重控制结构,在外部设有两个温度设定旋钮,通常称主设定和辅助设定钮。前者用于设定培养温度,后者用于设定Zgao极限温度(一般比培养温度设定钮提高1个刻度)。
门温一般是独立控制的,其意义在于使门温略高于箱温,以保证观察门不结露,便于观察箱内培养情况。设定时以玻璃门结露情况为准,一般结露面积占门面的1/3较为合适。结露面积过大应提高门温,反之应降低注意门温太高时会使培养箱温持续升高。
2、CO2浓度设定:
不同型号的仪器设定方法略有差别,一般有预置设定和直接设定两种形式,前者设有一个预置按钮,按下该钮即可观察和调整设定的浓度,设定工作可一次完成;后者根据设定钮上的刻度直接设定,但因刻度误差较大,通常要等显示稳定后再适当调整。
3、日常维护:
箱内应定期进行清洁和消毒处理;校准和参数设定工作一旦完成要防止随意乱动,对于无锁定装置的仪器应尤为注意;在不需要CO2培养条件时,要及时关闭CO2控制系统的电源开关,对于无此独立开关的仪器,应将CO2设定钮旋回0位,以使进气电磁阀关闭;当气瓶压力小于0.2kg/cm2时,应及时更换气瓶,而不要等压力降为0时再换气,以免在断气叉无人的情况下,进气电磁阀因长时间通电而烧毁。
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二氧化碳培养箱注意事项
二氧化碳培养箱是现代大中型医院进行科学研究必不可少的重要设备,分布于医院各个实验室。它通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞组织在生物体内的生长环境,来对组织、细胞、细菌进行体外培养的一种装置。
二氧化碳培养箱使用前准备工作
1、二氧化碳培养箱应由专人负责使用,操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后,不要随意扭动,以免影响箱内温度、二氧化碳浓度、湿度的波动,同时降低机器的灵敏度。
2、箱子的放置要水平,避免阳光直射和灰尘等,要保证仪器周围的气流循环,后部及侧面应留出5cm的空隙。
3、加装稳压电源保证电源电压波动不超过220V±10%。
4、所加入的水必须是蒸馏水或无离子水,防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用,经常检查箱内水是否足够,水位应加至“水位指示灯”灭灯时为止。
5、使用前箱内应用消毒酒精或碘溶液彻底擦洗,防止其他微生物污染,导致实验失败。
6、在房间安装空调,使环境温度保持在25℃左右。
7、所使用的二氧化碳必须是纯净的,否则降低二氧化碳传感器的灵敏度和污染二氧化碳过滤装置。
二氧化碳传感器正确充气
二氧化碳培养箱箱内气压由二氧化碳气体传感器控制。二氧化碳传感器正常反馈要求进气压为0.06MPa。当箱内气压降低时,二氧化碳传感器在低压刺激下有节奏地开闭,向箱内慢慢充气,当进气压达0.1MPa时,自动停止调节。
如充气方法不当,使进气压力增大,当超过0.1MPa甚至0.2MPa压力,会损伤二氧化碳传感器。开始这种损伤效应不明显,不易察觉,反复错误操作,二氧化碳传感器损伤累积Z终致命损坏,使气压调节失灵。
因此,二氧化碳传感器寿命与二氧化碳进气压大小有关,只要做好进气压调节,就能保护二氧化碳传感器性能。二氧化碳传感器价格昂贵,更换不易,所以一定要做好进气压调节,延长二氧化碳传感器使用寿命。
二氧化碳培养箱湿度
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。因为饱和湿度环境可以避免培养液中二氧化碳逃逸,培养液中pH值稳定,有利于细胞生长,足够的湿度水平并且要有足够快的湿度恢复速度(如在开关门后)才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。
所以二氧化碳培养箱使用过程中,在箱内托盘中放一定量的灭菌水(3/2至全盘),使箱内成为饱和湿度环境。如使用者忘记补加水,使培养细胞处于低湿度甚至干热环境中,培养液二氧化碳气体易挥发,液体pH值升高,影响细胞生长,在工作中要力求避免此问题发生。
样本多时,箱内分区存放,培养物用筐或瓷盘存放,这样存取快速,缩短开门时间,减少箱内气体和湿度变化,节省气体,稳定了细胞生长环境。
二氧化碳培养箱箱内消毒
二氧化碳培养箱污染是导致细胞培养失败的一个主要因素,所以要减少和防止污染的发生,主要途径是尽量减少微生物可以生长的区域和表面,采取消毒措施。
例如,针对箱内湿热环境易滋生细菌等问题,采用在1000mL水中加2mL新洁尔灭液,定期用酒精和紫外线消毒箱内空气,培养物酒精擦拭入箱内,盘里的水至少要一周换一次,控制污染,可以维持适应的蒸发作用,减少箱内微生物滋生速度。
为了培养箱免受污染并且保证仪器箱体内的生物清洁性,有些二氧化碳培养箱设计了自动排除污染装置来有效防止污染的产生。目前有多种消毒灭菌方式,如带有紫外消毒功能的CO2培养箱。
还有的设计生产了HEPA过滤器能过滤培养箱内空气,可过滤除去99.97%的0.3μm以上的颗粒,此外,还有设计了能使箱内达到高温湿热的环境从而杀死污染微生物,达到消毒灭菌目的的培养箱。
二氧化碳培养箱零点飘移
培养箱使用过程中,二氧化碳零点会发生自然飘移现象,这种现象不能在箱面气体显示框中表现出来,使用者也不易觉察到飘移结果。二氧化碳零点是否飘移,可通过二氧化碳气体测试仪,从控制盘上的采样口可以采到培养箱内的气体,然后用气体色谱仪就可以测到二氧化碳浓度了。
二氧化碳培养箱零点的调整的步骤(一般以空气为标准来校零,每半年进行一次,以Thermo 3111型为例):
1、把二氧化碳浓度设定值设为零,目的是不让钢瓶中二氧化碳进入箱内。
2、打开所有的门5min,往水盆内加上水,关上所有的门,稳定12h以上。
3、等温湿度充分稳定后,观察二氧化碳浓度显示值是否为零,若不为零,校正至零(按Mode键至Cal档,按左键或右键选择至显示“CO2 CAL XX.X”,用上键或下键把数值调为零,然后按Enter键确认)。
4、重新把二氧化碳浓度设定值设回(如5.0%)。
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二氧化碳培养箱的清洁
二氧化碳培养箱用途广泛,主要用来培养细胞、组织和某些特殊微生物,为它们提供一个良好的体外环境,广泛应用于细胞学实验、微生物学实验、组织学实验以及分子生物学实验。因此,二氧化碳培养箱的消毒和维护尤为重要。
二氧化碳培养箱的常见污染
混入二氧化碳培养箱(细胞培养环境)中,对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。不同的污染物对细胞的影响也有差别,有的影响是长期、缓慢和潜在的,而有的则能在很短的时间内YZ细胞生长或产生有毒物质杀害细胞。根据污染源不同主要可以分为:生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。
1、生物性污染:
这是Z常见也是危害Zda的污染。如细菌、病毒、真菌,支原体等。这些污染源有可能是人为带入,或是细胞在放入二氧化碳培养箱前已经受污染,再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力,而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的,因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。
2、化学性污染:
二氧化碳培养箱中许多化学物质都可以引起细胞污染。如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体都可能成为化学性污染的来源。不同化学物质对细胞污染是不一样的,有的可能促进或YZ细胞生长,有的甚至杀死细胞。
3、物理性污染:
培养环境中的物理因素,如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染,其主要是在代谢水平或分子水平上,影响细胞正常的生理过程。
4、气溶胶污染:
气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系,当微粒是微生物时,就是微生物气溶胶,如果这种微生物是病原性的,就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。
二氧化碳培养箱污染防控措施
1、二氧化碳培养箱的选择:
二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生,其主要是防污染设计和消毒灭菌系统的改进,以达到消毒灭菌的目的。如带有紫外消毒功能的二氧化碳培养箱、带HEPA过滤器的二氧化碳培养箱,以及带高温消毒的二氧化碳培养箱等,后者又分为高温干热和高温湿热两类。这些装置的灭菌能力各有千秋,紫外灯消毒范围有限,距离灯越远,消毒能力越差。
HEPA过滤器的过滤膜孔径有限,无法去除病毒和一些微小细菌,并且容易损耗,也有其局限性。相比而言,高温消毒则是比较有效的方法。而高温干热和高温湿热也有所不同,由于蒸汽潜热大、穿透力强,容易使蛋白质变性或凝固,因此高温湿热的灭菌效率比干热灭菌法高。
2、提高素质:
人为因素和态度可以对环境、人和物起到一个正面或负面的影响。以安全为目的,实验室内的工作人员应明白自身的态度和人为因素对实验环境的重要性。因此,对实验室工作人员进行专业培
3、重视管理:
细胞室内的二氧化碳培养箱应由专人负责管理,定期对系统进行校正,至少每年一次。各项数值一旦固定后,不要随意调节,以免影响箱内温度、湿度、CO2浓度的波动,降低机器的灵敏度,同时还会影响二氧化碳培养箱内的细胞生产状态。
使用前,对二氧化碳培养箱的各项指标进行系统校正,并且对箱体和内部进行消毒处理,等各项数值稳定一段时间后方可使用。一旦出现紧急问题,应及时上报,应由专业的人员进行操作,马上采取应对措施,以免造成不必要的损失。
4、规范操作:
二氧化碳培养箱的使用虽然很简单,但同样需要规范操作。进细胞室必须穿着实验服(白大褂),换上拖鞋或者穿一次性的鞋套。实验操作时必须带一次性手套,特别是打开二氧化碳培养箱前,必须先用75%的酒精喷壶喷洗双手再开二氧化碳培养箱,再取出细胞培养瓶或培养板。显微镜下查看细胞培养瓶或培养板后,再放回二氧化碳培养箱时,同样也要喷酒精消毒。
二氧化碳培养箱的两个门开关取(放)物要迅速,不可长时间开着,否则会影响CO2的浓度、温度和湿度,以及造成污染。尤其是不要忘了关好里层的玻璃门。切记开门时不要对着二氧化碳培养箱说活,大口呼吸甚至是打喷嚏。
5、加强防护:
如果实验人员生病而携带病菌,应带上口罩再进细胞室,病情严重的则不宜进行实验。女性同志实验时头发应梳起,防止皮屑污染及连带事件的发生。如果实验室条件允许,可以每人佩戴实验帽、手套和口罩,以防污染二氧化碳培养箱及对实验人员的自身的防护。
6、注重保养:
二氧化碳培养箱置于细胞室中,室内需保持干燥,环境温度不能超过30℃(建议:18℃-30℃)。二氧化碳培养箱放置在远离门窗、供暖设备和空调导管的地方,不能被阳光直接照射。二氧化碳培养箱的放置台面必须水平避震且非易燃材质,不能靠在墙壁或类似的建筑物上,其后部接电处和墙壁至少保留30cm的空间。一旦放好不宜再移动。
7、校正处理:
二氧化碳培养箱在放好后,再对箱体和内部进行消毒处理,并且对各项指标进行系统校正,等各项数值稳定一段时间后方可使用。因CO2气体对于健康是有害的,因此细胞室需安装足够的通风装置。空气中的粉尘气溶胶易造成二氧化碳培养箱的污染,需要一个流通的空气环境。将二氧化碳培养箱的管理任务分派给有经验的检查人员是十分重要的。如长期不使用二氧化碳时,应将CO2开关关闭,防止CO2调节器失灵。
二氧化碳培养箱清洁、消毒、灭菌处理
1、二氧化碳培养箱的清洁
清洁是指去除灰尘、污垢和有机污渍。清洁方法包括刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿布拖擦。粉尘、污物以及有机物是微生物的栖身之所,并可能影响除污染剂(KJ剂、化学杀菌剂以及消毒剂)的作用。
二氧化碳培养箱必须先经过清洁才能实现消毒和灭菌的目的,许多杀菌剂只对经过清洁过的物品才具有杀菌活性。清洁时必须使用与以后使用的消毒剂或杀菌剂化学性质上相容的试剂进行清洁、消毒。
①清洁箱体表面:先拂去表面的灰尘,再用湿的海绵或软布清洗,再用软布擦干。如果有污物则用低浓度的清洁剂清洗,然后擦干。
②清洗箱体内部:选择合适的消毒剂。所有的物件和表面必须彻底清洗,然后用无菌水冲洗,再擦干或晾干。
③清洗玻璃门:清洗箱内的玻璃门时使用的清洁剂和清洗培养箱内部时使用的相同。然后用蒸馏水漂洗,从而清除残留的清洁剂,Z后用软布把门擦干。
2、二氧化碳培养箱的消毒和灭菌
消毒是指杀死微生物的物理或化学手段,但不一定杀死其孢子。灭菌是指杀死所有微生物,当二氧化碳培养箱内细胞受到污染时则需要采取灭菌措施。一般,在二氧化碳培养箱内细胞没有污染的情况下平均1-3个月彻底消毒一次。Z常用的3种消毒灭菌的方式是:液体消毒剂、紫外和加热。
①液体消毒剂:选择对二氧化碳培养箱无腐蚀性的液体消毒剂,并且液体消毒剂的消毒效果好坏和很多因素有关。比如:场所的温度、接触时间、pH、穿透能力、有机物的反应。这些因素中的一些很小的变化可能会造成去污剂的效力上大的不同。因此甚至在很有利的情况下,当Z终要求必须无菌时,液体去污剂也不是完全可信赖的去污方法。
②紫外消毒:一般先用蒸馏水清洗干净后,再用紫外灯照射(带紫外灯的二氧化碳培养箱)一天或者用手提式的紫外灯照射。
③加热:湿热和干热被认为是杀菌Z有效的方法。在一般环境下,高压灭菌器加热到121℃快速产生蒸汽是Z方便的方法。干热160℃-170℃,2-4小时在不具有渗透性、非有机体的物质(如玻璃)是可行的净化方法,但是甚至在有机体或非有机体的浅层也不能被绝缘。
除了以上几种方法外,还可以采用联合杀菌的方法,几种消毒灭菌的方法同时使用来达到彻底清洁的效果。
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二氧化碳培养箱维护保养
二氧化碳培养箱是一种能使细胞在人工环境中正常生长的科学实验装置。细菌培养,尤其是苛氧菌的培养,需要37℃、5%的浓度和饱和湿度的二氧化碳培养箱,为细菌提供生长环境。
二氧化碳培养箱简介
二氧化碳培养箱价格昂贵,而且温度和气体浓度传感器灵敏,如果在使用过程中操作不当,容易导致仪器损坏,影响正常工作和仪器使用寿命。二氧化碳培养箱种类繁多,但核心部分主要是CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置。一般温度调节范围在5℃-50℃,湿度在95%以上,CO2控制范围0%-20%。当空气冲进箱内后,通过能产生潮湿的含水托盘,再用CO2调节装置调节CO2的张力,或者将空气和CO2按比例混和来调节CO2张力。
二氧化碳培养箱从原理上主要分为三类:气套式二氧化碳培养箱、水套式二氧化碳培养箱和N2-O2-CO2培养箱。
气套式二氧化碳培养箱采用直接加温空气方式,其温度感受器用不受外界温度、湿度影响的红外线装置,主要用于高精度的培;
水套式二氧化碳培养箱使用热容量大的水加温的水套箱,当箱体温度变化和停电时也可保持稳定的温度环境;
N2-O2-CO2培养箱可控制箱内O2的浓度,实现了与生物体内更加相近的培养环境,多用于高精度的细胞培养。
气体传感器维护保养
培养箱内气压由CO2气体传感器控制。要求进气压为0.06兆帕。开门后,箱内气体丢失,压力下降。关门后气体传感器在低压刺激下有节奏地开闭,向箱内充气,当进气压达到0.06兆帕时,自动停止调节。
在日常使用过程中,尽量避免不必要的打开培养箱,从而减少传感器的工作负荷,延长其使用寿命。另外,在换气瓶时,避免采用加大进气压的快速充气法,使用0.06兆帕的压力,无形中会损伤CO2传感器。开始这种损伤效应不能显示,但反复操作,时间一长,CO2传感器就会损伤,致气压调节失灵。一旦传感器失灵,就会导致箱内浓度无法控制,影响培养环境。
当出现报普信号“CO2 SNSR ERR"时,首先观察CO2探头表面是否有水珠,若有水珠则用纯棉纱布擦拭,其次观察CO2探头是否松动,若有则插紧即可。若仍不能解决则可能是探头损坏。
在J/R CO2控制的二氧化碳培养箱中,使用零点自动定标装置,且每24小时自动定标一次,若在循环自动定标期间CO2的浓度超过0.45%,则出现“IR AUTO ERR”报警信号,造成这一报警的原因可能有以下几点:
1、自动校正零点的泵的密封圈,过滤器或管路原因导致气体不能接触到探头。
可能是:①气泵没有加电或气泵损坏;②气泵与探头之间的管路脱落;③过滤网堵塞或“O"型密封圈老化。
2、箱内温度低于标定点,如:箱内温度测出为30℃而标定点温度为50℃,在此时重新标定CO2,则可解除报警信号。
3、可能实验室内的CO2的浓度过高,实验室内的CO2的浓度过高有可能是CO2瓶漏气所致。
4、CO2探头过脏所致,先进行擦拭,若仍不能解决,则更换CO2探头。
温度传感器维护保养
培养箱温度由温度传感器控制,它的正常运行需要25℃室温条件。为了监测室温,在培养箱外放一支水银温度计,每日观察并且作好室温登记制度。
在日常使用时,箱内同样放1支水银温度计监测箱内温度。温度传感器正常运行,使设定温度数(37℃)、箱面显示数和箱内温度三者一致。当室温高于30℃时,温度传感器调节失灵,仪器就会报警,提示箱内温度、箱面温度、设定温度三者不一致。
如果在白天,工作人员就会降低室温,保证培养箱温度恢复正常。但在晚上,仪器就会持续报警,影响培养环境和损伤温度传感器。因此,每日观察和保持室温,是保养培养箱的必要条件和工作程序。
二氧化碳培养箱饱和湿度的监控
二氧化碳培养箱使用过程中,要求在箱内托盘中放2/3至全盘的灭菌水,维护箱内饱和湿度环境。因为饱和湿度环境可以避免CO2逃逸,维持PH稳定,有利于细菌生长。
实际工作中,工作人员常忘记补充水,使箱内处于低湿度或干热环境,致CO2挥发,PH改变,影响细菌生长。为了避免该问题出现,要求工作人员每天打开培养箱时,首先检查托盘内水分是否充足,是否需要补充,然后再取箱内培养基。
二氧化碳培养箱内消毒
因为二氧化碳培养箱主要用于细菌培养,时间一长,箱内就会有细菌的滋生和繁殖,从而容易污染接种的培养基。
为了避免交叉污染,培养箱内托盘盛装的无菌水是按照1000:2的比例加人新洁尔灭液,同时定期用75%酒精和紫外线消毒箱内空气,切断箱内微生物滋生的环境,保持箱内处于无污染状态,以利于培养基内细菌生长。在消毒前一定要移走托盘,空气过滤器及温度探头。用皂液水和消毒液的混和液清洗加湿盘,然后用蒸馏水漂洗,Z后用70%酒精喷淋处理加湿盘。
总之,在二氧化碳培养箱使用过程中,只要保持室温、湿度和箱内消毒工作和日常正确使用,就能保证二氧化碳培养箱正常运行,为临床微生物室的细菌培养提供服务。
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二氧化碳培养箱故障分析
二氧化碳培养箱可以使细胞等在人工环境中生长。现已广泛应用于各种组织和细胞的培养、肿瘤、心脏疾病研究、细菌培养、遗传工程及试管婴儿等。就以下8例故障现象及维修方法对二氧化碳培养箱故障分析与维修进行介绍。
故障现象1:不升温,但能显示常温
故障分析与排除:能够显示常温,说明温度检测部分完好,是属于温度加热控制部分的问题。
不升温可以从以下几个方面检查:
1、面板"add water”灯是否亮;
2、过温保护继电器(TS1 TS2)是否闭合;
3、固体继电器TU1输入端是否有DC6V的驱动电压,TU1的(1)脚是否有AC100V的电压;
4、加热器H1是否断路。
经检查发现TU1输出端断路,由于此类型号固体继电器不易购得,可以选用其它型号的固体继电器代替,参数为驱动端电压DC6V-9V,输出端电流输出>15-20A,2耐压>220V为宜。如果实在购买不到,也可采用加中间继电器的方法,只是控温精度略差一些,但作为应急措施还是可行的。
故障现象2:温度不显示不升温
故障分析与排除;ALSCO 二氧化碳培养箱的温度控制器和温度显示器是采用美国sellden公司的温度控制成品,控制器采用双面焊接法,元件密度大,散热空间小,因此极易造成产热元件非正常损坏。
此类故障先后发生两次,一次是稳压5V所用的7805稳压块损坏,更换后为了防止再次损坏用一块小铝片固定在散热部位,改善了散热条件;另一次现象与上述情况相同,经检查是电源变压器初级断路,由于此类变压器(初级100V次级6V)不易买到,可以根据变压比的原理,选用国产初级220V,次级12V或双6V功率5W~10W以下的成品变压器代换,如果选用双6V变压器需将抽头悬空,用导线引出找一适当位置固定即可。
故障现象3:CO2浓度显示偏高,约高出设定值2%~5%,且不稳定
故障分析与排除:引起CO2浓度偏高且不稳定的因素较多,归纳起来主要有以下几种情况:
1、过滤器堵塞;
2、管道漏气;
3、CO2取样检测管道内积水;
4、取样泵速过低,取样速度过低造成检测系统反应迟钝。
以上几种情况均表现为当CO2浓度显示达到设定值以后CO2电磁阀不能马上关闭。此例故障经检查发现泵速偏低,按手册说明借助流量计进行检查,发现泵速偏低,打开上盖找到VR3电位器,逆时针转动少许同时观察流量计情况(0.8~1.0L/min)。
如果没有流量计,也可以根据阀门的动作来进行调整,当流量合适时,浓度达到预定值后阀门应立即关闭,流量过大过小都不利于检测,过大尽管检测灵敏度高,但容易将湿度水槽内的水抽入管道,引起浓度异常的故障,过小检测系统反应迟钝,不能排除故障。一般讲经过几次细心观察调整,均能达到上述要求。
故障现象4:当浓度达到设定值后进气阀关闭,但浓度仍然继续上升
故障分析与排除:浓度达到设定值后能立即关闭电磁阀,说明CO2分析检测系统基本正常溶度继续上升一般有以下几种可能:
1、阀门密封垫老化或存有异物,致使阀门关闭不严;
2、分压器输入CO2的压力过高,一般情况分压表的压力应小于0.3kg/cm2,如果压力过大也会造成阀门关闭后,CO2仍向箱内渗气的情况。
此例故障经检查发现是培养箱阀门橡胶密封垫老化,用电吹风加热法,对密封圈加热使其恢复压缩性,然后涂少许硅胶,故障排除。
故障现象5:CO2显示零点偏离
故障分析与排除:此类故障有以下几种可能:
1、管道漏气或堵塞;
2、CO2测量电桥电路因长期工作元件参数变化引起失衡、检查方法是将CO2钢瓶主阀关闭,打开培养箱门,约2分钟以后观察CO2显示值。
如果CO2显示溶度不在零点,说明零偏离,此时可调整面板上ZERO细调,如果调整不过来,可将上盖打开找到PB1线路板上VR1(CO2零点粗调)进行调整,如果无法调整则考虑为CO2探头老化,只能更换。
故障现象6:噪声大
故障分析及排除:噪声大一般是来自气泵或风扇电机,由于二氧化碳培养箱长年工作,电机往往因缺油,致使轴孔损严重而引起噪声,此机种以风扇电机故障较多。
如果轴孔摩损程度较轻,可以采用清洗后加适量机油的方法解决,如果摩损严重就只能考虑更换电机了,此电机市场上不易购得,可以选用进口冰箱上用的风扇电机代替,效果很好,但应注意冰箱电机的电源是220V,原电机为100V,因此可将旧电机引线断开,将新电机直接接至100V变压器的输入端即可。
故障现象7:水已加满,但“add Water”仍灯亮
故障分析与排除:大多数二氧化碳培养箱都采用水套恒温加热方式,其优点是温度控制精度高,由于使用中不断蒸发水位下降,为了保证水套中的水不致蒸干出现干烧问题,二氧化碳培养箱均设有水位自动提示灯“add Water”,用以告诫使用者及时向水套补充水,当“add Water”灯亮以后加热控制电路仃止加热,用以保护样品和仪器,此例故障是水已加满但“add Water”灯仍不熄灭,一般情况是液位传感器问题。
LNA - 111DH液位传感器是由一只磁性浮环与一个干簧管继电器构成,正常情况下,浮环随水位变化而上升下降,如果因其内表面积有水垢,上下位移受阻而卡死,就会出现上述故障,解决方法是
清除水垢重新装入即可排除;
Forma Scientifc 3191、3192型培养箱的液位传感器则是由一根铜杆构成,虽然这样结构克服了卡死的问题,但会因铜杆导线端锈蚀,电阻增大而出现水已加满而“add Water”灯仍不熄灭的问题,此种情况3191、3192都发生过,解决办法是找一根长度相同的铜锣丝代替,效果很好。
故障现象8:夏季时培养箱温度高于设定温度过1℃-2℃
故障分析与排除:此故障非常常见,一般是由于夏季室温过高,散热条件差而引起的,可采取改善散热条件,适当降低门混的方法解决,(门温一相温+1℃~2℃即可,以玻璃内侧不结露为宜)Z好在培养箱的房间内安装空调,用以改善使用环境温度。
以上是较为典型的8例故障,二氧化碳培养箱归结起来可以分为两大系统,一个是恒温控制系统:一个是CO2分析系统。温度控制系统又分为温度设定、温度保护、温度显示。CO2分析系统主要有CO2控制系统和取样分析系统,了解这些对我们快速准确判断故障部位和排除很有帮助。
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二氧化碳培养箱的选购
二氧化碳培养箱广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产,已经成为上述领域实验室Z普遍使用的常规仪器之一。
全世界的用户对二氧化碳培养箱都有两条Z基本的要求:一是要求二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供Z精确稳定的控制,以便于其研究工作的进展;二是要求二氧化碳培养箱能够对二氧化碳培养箱内的微生物污染进行有效的防范,并且能够定期消除污染,以保护研究成果,防止样品损失。所以,选购二氧化碳培养箱的老师Z关心的当然就是其高可靠性、对污染的防范和控制及使用方便。
二氧化碳培养箱的选购——温度控制系统
1、二氧化碳培养箱加热方式选择
气套式加热和水套式加热,两种加热系统都是精确和可靠的,同时他们都有着各自的优点和缺点。
水套式加热是通过一个独立的水套层包围内部的箱体来维持温度恒定的,其优点:水是一种很好的绝热物质,当遇到断电的时候,水套式系统就可以比较长时间的保持二氧化碳培养箱内的温度准确性和稳定性(维持温度恒定的时间是气套式系统的3-4倍),有利于实验环境不太稳定(如有用电限制,或者经常停电)并需要保持长时间稳定的培养条件的用户选用。
气套式加热是通过遍布箱体气套层内的加热器直接对内箱体进行加热的,又叫六面直接加热。气套式与水套式相比,具有加热快,温度的恢复比水套式二氧化碳培养箱迅速的特点,特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。此外,对于使用者来说气套式设计比水套式更简单化(水套式需要对水箱进行加水、清空和清洗,并要经常监控水箱运作的情况)。
Thermo Scientific™ Forma™ 310直热式CO2培养箱(点击图片查看更多产品详情)
2、二氧化碳培养箱温控系统
保持二氧化碳培养箱内恒定的温度是维持细胞健康生长的重要因素,因此精确可靠的温控系统是二氧化碳培养箱不可或缺的重要部分。为了使二氧化碳培养箱更加稳定的工作,推荐用户选用具备相互独立三重温度控制功能的二氧化碳培养箱,即箱内温度控制、超温报警控制和环境温度监控。
3、二氧化碳培养箱温度均一性
二氧化碳培养箱箱体内的温度均一性也是用户需要考虑的主要因素,一般在箱体内配备了风扇以及风道的二氧化碳培养箱的均一度要好很多,同时此装置还有助于箱内温度、CO2浓度和相对湿度的迅速恢复。
当然,风扇/风道的优化也是同等重要的,大直径风扇相比其他品牌二氧化碳培养箱的风扇,能够在低转速(低风速)时产生大的空气循环流量,在达到均一性目的的同时,降低风速、减少箱内震动。降低风速、减少震动同时也就大大提高了箱内细胞培养的成功率。
二氧化碳培养箱的选购——CO2浓度控制系统
1、两种控制系统:
红外传感器(IR)或热导传感器(TCD)进行测量。两种传感器都是准确的,但都各有优缺点。
热导传感器监控CO2浓度的工作原理是基于对内腔空气热导率的连续测量,输入CO2气体的低热导率会使腔内空气的热导率发生变化,这样就会产生一个与CO2浓度直接成正比的电信号。
红外传感器(IR)它是通过一个光学传感器来检测CO2水平的。IR系统包括一个红外发射器和一个传感器,当箱体内的CO2吸收了发射器发射的部分红外线之后,传感器就可以检测出红外线的减少量,而被吸收红外线的量正好对应于箱体内CO2的水平,从而可以得出箱体内CO2的浓度。
由于IR系统是通过红外线减少来确定箱内CO2浓度,而箱体内颗粒物能够反射或部分吸收红外线,使得IR系统对箱体内颗粒物的多少比较敏感,因此IR传感器应用在含HEPAGX空气过滤器的二氧化碳培养箱内比较合适。
2、CO2测量系统自动校准功能:
无论哪种CO2测量系统在使用一段时间后都会产生漂移,而产生漂移后直接会导致箱体内二氧化碳浓度不能稳定在我们的设定值,致使培养失败,所以建议用户在选购二氧化碳培养箱时必须要选择带有CO2测量系统自动校准功能的二氧化碳培养箱。
二氧化碳培养箱的选购——相对湿度影响
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。维持足够的湿度水平并且要有足够快的湿度恢复速度(如在开关门后)才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。目前大多数的二氧化碳培养箱是通过增湿盘的蒸发作用产生湿气的(其产生的相对湿度水平可达95%左右,但开门后湿度恢复速度很慢)。
建议用户在选购二氧化碳培养箱的时候尽量选择湿度蒸发面积大的二氧化碳培养箱,因为我们知道湿度蒸发面积越大,越容易达到Zda相对饱和湿度并且开关门后的湿度恢复的时间越短。
二氧化碳培养箱的选购——清洁装置选择
污染是导致细胞培养失败的一个主要因素,因而,二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生,其主要途径都是尽量减少微生物可以生长的区域和表面,并结合自动排除污染装置来有效防止污染的产生。如何选择何种清洁装置呢?
各种方式的灭菌能力:
紫外消毒能力是与紫外灯距离目标的距离的二次方成反比,距离越远,消毒能力越差,所以紫外消毒方式有其局限性,难以达到彻底灭菌的要求;
HEPA过滤器由于受到过滤膜孔径的影响,无法去除病毒和一些微小细菌,也有其局限性;
高温消毒是目前比较有效消毒灭菌的方法,高温消毒又分为两类,一是传统的高温干热消毒,另一种是先进的高温湿热灭菌。
高温干热消毒与高温湿热灭菌:
高温湿热由于蒸汽潜热大,穿透力强,容易使蛋白质变性或凝固,因此该法的灭菌效率比干热灭菌法高。其原因有三:
①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关,含水量愈大,发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分,所以较同一温度的干热空气中易于凝同。
②湿热灭菌过程中蒸汽放出大量潜热,加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所需温度低,如在同一温度下,则湿热灭菌所需时间比干热短。
③湿热的穿透力比干热大,使其深部也能达到灭菌温度,故湿热比干热收效好一些。所以高温消毒并不是简单的看消毒温度,主要是看是否湿热消毒。
从使用角度看,湿热消毒一般控制在90℃就能达到很彻底的消毒效果,整个消毒过程中二氧化碳培养箱内的所有附件都不用取出,可以全部进行消毒;而干热消毒为了达到较好的效果,温度一般都在100℃以上,在这种温度下消毒二氧化碳培养箱内的传感器、HEPA过滤器等都要在消毒过程中取出,等消毒结束再装上,这样即麻烦,而且增加二次污染的几率。
所以建议用户在选购二氧化碳培养箱时选择含高温湿热灭菌方式的二氧化碳培养箱。
二氧化碳培养箱的选购——其它因素
二氧化碳培养箱的容积也是一个不可忽略的因素,买小了不够用,大了又浪费又占地方。二氧化碳培养箱的可选容积非常广,而且每种类型又有不同的容积可选。此时,就需要您在选购前对所需二氧化碳培养箱容积的范围有一个比较准确的了解,并在此基础上多预留一点空间,以保证不时之需。
此外,每一个使用者都希望所用的仪器能够方便好用,微处理控制系统和其它各种功能附件(如高温自动调节和警报装置、CO2警报装置、密码保护设置、自动校准系统、LCD显示系统等等)的运用,就使得二氧化碳培养箱的操作和控制都非常的简便。
不同的微处理系统虽然名字不相同,但是其原理与控制效果则无甚区别,选购时不必太在意它们名字上的区别,关键是要自己觉得使用起来方便,容易操作。
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