化学发光免疫分析仪

化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项Zxin免疫测定技术。

1.什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？

使用包括荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物质等标记物标记Ag或Ab，在和标本中的相应Ab或Ag反应后，没有必要对Ag-Ab复合物本身进行测定，而是对复合物中的标记物进行测定，通过标记物的放大作用，使得免疫技术的敏感性进一步得到提高。三要素：1）.在检测系统中一般会使用到常标记在抗体上的一种叫标记物（labe领）的物质。2）.一般会有一个分离（separation）的过程。3）.Z后在读取信号前需要对分析的模式（format）仔细的关注一下。

2.标记免疫技术主要有哪几种？

主要经历了四种标记免疫技术的发展：

1）荧光素(Fluorophores)

2）FIA

放射性同位素(Radioisotopes)

3）RIA酶(Enzymes)

4）EIA化学发光物质-CLIA

3.什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？

化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。

化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中Z有前途的方法之一。

（1）和放免（RIA）产品比较与放射免疫试剂（RIA）对比，化学发光使放射性核素的污染和对操作人员的伤害得以避免，使反应时间大大缩短了，同时灵敏度非常的高。

（2）和酶免（ELISA）产品对比，灵敏度与可测范围要比酶免产品高出许多，并且ELISA法操作简单方便，反应时间也比较短。

与化学发光免疫分析仪的原理相关文文章：
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　　化学发光免疫分析仪由于其具有灵敏度高，特异性强，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法。新制造、使用中和修理后的化学发光免疫分析仪一般都要进行校准和测试。

化学发光免疫分析仪工作原理

　　化学发光免疫分析仪是用发光剂直接标记抗体的一类免疫分析法分析仪。

　　化学免疫分析原理是检测化学反应中，某些化学基因被氧化后形成激发态，当返回基态的同时发射一定波长的光子，利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的非放射免疫分析为化学发光免疫分析。此方法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，线性范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法。

　　由于化学发光免疫分析仪的检测灵敏度和自动化程度非常高，因此它的准确度评价只能采用标准生化试剂在被检分析仪上严格按说明书操作，重复测量多次，看测定的结果是否与标准生化试剂的靶值相符合。

化学发光免疫分析仪校准设备

　　1、校准设备与试剂

　　标准生化试剂：免疫质控血清，不确定度为0.3%(k=2);移液管：50ml，A级;量杯：25ml;分度吸管：0.25ml，A级：电子交流稳压器：AC220V，1kW;混匀器。

　　2、校准工作环境

　　校准室内的温度为(20±5)℃：校准室内的相对湿度不大子80%;电源电压需经过电子交流稳压器的稳压：校准室内有较好的防尘措施：远离强电磁场的干扰。

化学发光免疫分析仪的校准方法

　　1、外观

　　用目测检查化学发光免疫分析仪的涂漆，镀层和玻璃器件;用手拨动各旋钮，开关和样品台，以及检查紧固件情况：分析仪有关的技术文件应齐全，其铭牌应字迹清晰。

　　2、准确度的校准

　　仪器准备：化学发光免疫分析仪与标准生化试剂在校准室内的温度平衡时间应不小于2小时;接通电源预热15分钟，将分析仪各开关和旋钮按分析仪的说明书进行预调。

　　校准液的配制：本实验采用多项目免疫质控血清进行化学发光免疫分析仪准确度和重复性的校准。用移液管和分度吸管取5.00ml质控血清，并加复溶液5.00ml，置于25ml量杯中。

　　准确度测定：将装有校准液的量杯放置于混匀器中，混匀30秒;按常规测试方法用化学发光免疫分析仪测量，连续测量六次，舍去第—个测量值，其余填人原始记录，并计算平均值，判断其结果是否符合标准生化试剂证书中的靶值要求。

　　3、重复性的校准

　　调节好化学发光免疫分析仪，将开关断开再启动，测量校准液，重复测量六次，舍去diyi个测量值，记录结果并计算相对标准偏差，判断其结果是否符合标准生化试剂证书中的靶值要求。

化学发光免疫分析仪校准注意事项

　　在一次校准过程中要采用同一类型的免疫质控血清标准物质;免疫质控血清的复溶与稀释倍数应按照其使用说明中的要求;在配制校准中复溶液不可用其他液体代替;用后剩余的质控血清不宜保留做隔日测量，试剂中某些反应物质的化学性质不稳定，会扩散到溶液中去，导致污染而使结果会受到影响。

化学发光免疫分析仪校准技术要求

　　1、外观

　　化学发光免疫分析仪应附有产品说明书，产品合格证书以及配套附件;分析仪不应有影响工作性能的机械损伤;各旋钮，开关应定位准确，功能良好;样品台应平稳整洁;分析仪上必须标明型号，出厂日期，编号及厂名。

　　2、准确度

　　符合标准生化试剂证书中的靶值要求并优于10%。

　　3、重复性

　　符合标准生化试剂证书中的靶值要求并≤5%。

　　4、校准周期

　　经校准的化学发光免疫分析仪发给校准证书或测试报告，并标明校准或测试结果。校准周期不超过一年。

与化学发光免疫分析仪校准方法相关文文章：

化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项Zxin免疫测定技术。

影响因素

1.试剂

有很多生成化学发光免疫检测试剂的厂家，厂家不同，生产的试剂灵敏度与特异性也因此存在差异。如果使用的试剂劣质，那么就会造成假阳性或假阴性结果。所以结果准确的关键是选择高质量的试剂。在实验之前，首先从冰箱中取出实验中所需的所有试剂及待测样品，使用的时间为温度与室温（25℃）平衡1小时以上之后。需要在每次使用后将已开封试剂盒及时放回2～8℃冰箱内保存，试剂应当在开封后1个月内使用。为了避免混用导致重复性差，不能混用不同批号试剂盒中组分。

2.操作技术

不能准确地吸量，会造成测定的重复性差，从而对检测结果产生直接的影响。所以要经常清洗和定期校正加样器。加样过快会导致孔间污染。不要将样本加错。不要在孔壁上部非包被区添加样本及试剂，会导致重复性差。

3.标本

需要防止严重溶血的现象出现。血红素基团包含在血红蛋白中，其的活性和过氧化物类似。所以，在采用HRP为标记酶的酶促化学发光测定中，如果血清标本中有较高浓度的血红蛋白，那么在温育过程中其就很容易吸附于固相，从而导致后面加入的HRP底物反应值偏高，造成假阳性。

在对样本采集和血清分离的过程中，需要防止细菌污染。抗原抗体等蛋白可能会因为细菌生长所分泌的一些酶而分解。使用相应酶作标记的测定方法会受到一些细菌的内源性酶的非特异性干扰。对于机体的真实情况，新鲜标本的检测结果更能准确的反映，检测应当在采血后24小时内完成。在采集血液标本后必须使其充分凝固再对血清进行分离，如果依然有部分纤维蛋白原残留在血清中，那么容易导致假阳性结果。若采血后24小时内不能完成检测，则应当将血清分离后，在-20℃冰箱妥善保存，将原始记录做好。反复冻融，容易导致假阳性。

与化学发光免疫分析仪故障分析相关文文章：
• 化学发光免疫分析仪的常见故障和维护
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免疫分析拥有放射免疫检验、荧光免疫检验、酶标免疫检验等不同时期的经历，免疫分析发展的一个新阶段为全自动化学发光免疫检验，其不仅快速，准确，而且环保，它的这些优点已经成为了人们的共识。所以通往免疫检验wan美境界的必经之路必定为全自动化学发光免疫分析。

结构

试剂区、样品区、反应测试管加样区、反应废液区等共同组成了全自动化学发光免疫分析仪，其在实验室分析血液样品中的被分析物的时候会被使用到。

优势

超声波清洗、混匀技术

免疫学原理

智能化性能

完备的控制、供给系统

独有的分立一体化设计

强大的样本处理系统、急诊功能

工作原理

通过对患者血清进行检测从而免疫分析人体的医学检验仪器。在固相包被有抗体的白色不透明微孔板中加入定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）。固相载体上的抗体和血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物特异性结合，将未反应的游离成分分离洗涤掉，然后，将鲁米诺Luminol加入，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，以光子的形式释放能量。在这时候，在分析仪内放入微孔板，将各孔的光子数依次由光子计数器通过仪器内部的三维传动系统读出。按照标准品建立的数学模型对样品中的待测分子浓度进行定量分析。Z后，将数据报告打印出来，用来对临床诊断起辅助作用。

与化学发光免疫分析仪结构相关文文章：
• 化学发光免疫分析仪的结构

按照标记物的不同，可以将化学发光免疫分析法分为直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析以及电化学发光免疫分析法。

分类

直接化学发光免疫分析

使用吖啶酯对抗体（抗原）进行直接标记，和待测标本中相应的抗原（抗体）发生免疫反应，使固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯抗体复合物，此时，仅要将NaOH和氧化剂（H2O2）使得环境变为碱性，不需要催化剂对其催化，吖啶酯也能够分解、发光。

通过集光器和光电倍增管对单位时间内所产生的光子能进行接收和记录，光的积分和待测抗原的量成正比，待测抗原的量能够通过标准曲线计算出来。

化学发光酶免疫分析

酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同。

电化学发光免疫分析

在电化学发光免疫分析系统中，固相载体包被抗体（抗原）为磁性粒子，抗体（抗原）采用三联吡啶钌来进行标记，在反应体系内待测标本和相应的抗原（抗体）发生免疫反应之后，就有抗体-待测抗原三联吡啶钌抗体复合物形成，这时，在流动室內吸入上述复合物，与此同时，将TPA缓冲液引入。当磁性粒子子电极表面流经时，受到了安装在电极下面的电磁铁的吸引，而缓冲液会将没有结合的标记抗体和标本冲走。与此同时向电极施加电压，将电化学反应启动，在电极表面进行三联吡啶钌和TPA的电子转移，使得电化学发光产生，光的强度和待测抗原的浓度成正比。

与化学发光免疫分析仪分类相关文文章：
• 化学发光酶免疫分析的分类
• 免疫分析历史和发光分类
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化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项Zxin免疫测定技术。

化学发光免疫分析方法的发展趋势

目前为止，化学发光免疫分析方法的主要表现为：

1.化学发光免疫分析方法和结合使用，使得化学发光免疫分析的灵敏度和速度显著地提高，使得化学发光体系的应用范围极大地拓宽。

2.基因工程抗原、抗体的制备以及广泛的应用，将对化学发光免疫分析方法的发展起到进一步促进的作用。

3.不断地对常见发光体进行完善，不断地深入研究化学发光底物、氧化剂、催化剂、增敏剂及固相材料，会使得今后的研究中不断的涌现性能更加优异的化学发光体系。

临床应用

1.ZL药物检测

2.过敏性疾病

3.骨代谢

4.病毒标记物

5.心血管系统

6.糖尿病

7.感染性疾病

8.肿瘤标记物

9.贫血因子

10.肾上腺/垂体激素

11.生殖激素

12.甲状腺激素

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