小鼠血浆去红细胞的原理

    小鼠血浆去红细胞的原理

    小鼠血浆去除红细胞（裂解）的原理主要基于‌渗透压差‌导致红细胞破裂，同时保护白细胞等有核细胞‌。具体过程如下：

    核心原理

    低渗环境破坏红细胞‌

    红细胞裂解液通过低渗作用使红细胞膨胀破裂‌。裂解液中的氨根离子无法通过细胞膜，而其他离子可自由进出，造成细胞内外的离子浓度差，形成渗透压差，导致水分进入红细胞内使其膨胀裂解‌。

    保护有核细胞‌

    裂解液中添加的稳定剂可保护白细胞膜免受低渗损伤，确保有核细胞结构完整‌。例如，小鼠血液裂解时间通常为4-5分钟，而人血需10-15分钟，以避免过度裂解影响目标细胞‌。

    操作流程

    样本处理‌：采集抗凝血（如肝素或EDTA抗凝）后，加入裂解液（如1×ACKLysisBuffer），轻柔混匀并室温孵育‌。

    离心分离‌：裂解后离心（如300g，5分钟），弃去红色上清，保留白色细胞沉淀‌。

    洗涤重悬‌：用PBS洗涤细胞沉淀，最终用缓冲液重悬用于后续实验‌。

    注意事项

    抗凝剂选择‌：若直接裂解红细胞，肝素或EDTA抗凝管均可；若需分离PBMC，则必须使用肝素抗凝‌。

    避免溶血‌：采血时需确保容器干燥，避免抽血过快产生气泡，否则会导致红细胞非特异性破裂‌。

    通过上述方法，可高效去除红细胞，保留血浆中的有核细胞用于流式分析等实验‌。

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