如何检测胶原蛋白敷料贴、凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量?
重组Ⅲ型胶原蛋白是通过生物工程技术将人体胶原蛋白的mRNA逆转录成cDNA并嫁接至载体上,再利用转录酶表达成原始蛋白,经过高密度发酵、分离、复性、纯化、酶切工艺生产的一种高分子生物蛋白。
试问谁不想拥有“婴儿肌”呢?大家看到细腻的皮肤都会感慨一句:这满满的胶原蛋白!
Ⅲ型胶原蛋白主要存在于婴儿皮肤或血管内膜、肠道中,与皮肤损伤修复和修复质量密切相关,因此该类医药 用品对改善皮肤质量、促进皮肤创伤修复具有重要作用。
重组Ⅲ型胶原蛋白的有效含量直接决定了基于其研发的医药用品的效果。本方案给出了利用凯氏定氮法测定重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量的方法。
凯氏定氮仪测定重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、
凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量
仪器与试剂
1、仪器
K1160全自动凯氏定氮仪,SH520自动消解仪,分析天平 。
K1160全自动凯氏定氮仪
2、试剂
硫酸(分析纯),20g/L硼酸溶液,溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,400g/L氢氧化钠溶液,混合催化剂(3gK2SO4、0.2gCuSO4),0.1mol/L硫酸标准滴定液
实验方法
1、样品制备
凝胶敷料、液体敷料:用5ml针管抽取样品,利用减重称量法称取烘干后混合均匀的样品3.0g(精确至0.1mg)加入消化管,再加入混合催化剂3.2g,沿消化管壁加入浓硫酸10mL。
敷料贴:将敷料贴中的液体组分挤出,收集于试管中,后操作方法与凝胶敷料、液体敷料相同。
2、消解
将加完样品和试剂的消化管放置于消解仪上,盖好排废罩,设定消解仪参数如下表所示:
3、测试
消解完成后,待消化管冷却至室温后取下备用。检查定氮仪各试剂是否充足,同时做仪器空白,待仪器空白稳定后,可将消解好的样品上机测试。定氮仪参数设置如下表所示:
结果与讨论
1、实验结果
实验选取的重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、液体敷料、凝胶敷料经消解、蒸馏、滴定,得到实验结果如下表所示:
2、结论
本次测试的重组Ⅲ型胶原蛋白液体敷料、凝胶敷料、敷料贴的蛋白质含量及RSD值如上表所示,三种样品的RSD分别为0.78%、0.20%、0.12%,结果平行性良好。
注意事项
对于液体或水分含量较多的凝胶样品,直接升温至420℃消解会造成样品的暴沸,导致样品损失和安全隐患。因此,应先设置较低温度(200℃左右)赶出水分,再逐步升温至420℃消解。
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