如何检测胶原蛋白敷料贴、凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量？

重组Ⅲ型胶原蛋白是通过生物工程技术将人体胶原蛋白的mRNA逆转录成cDNA并嫁接至载体上，再利用转录酶表达成原始蛋白，经过高密度发酵、分离、复性、纯化、酶切工艺生产的一种高分子生物蛋白。

试问谁不想拥有“婴儿肌”呢？大家看到细腻的皮肤都会感慨一句：这满满的胶原蛋白！

Ⅲ型胶原蛋白主要存在于婴儿皮肤或血管内膜、肠道中，与皮肤损伤修复和修复质量密切相关，因此该类医药 用品对改善皮肤质量、促进皮肤创伤修复具有重要作用。

重组Ⅲ型胶原蛋白的有效含量直接决定了基于其研发的医药用品的效果。本方案给出了利用凯氏定氮法测定重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量的方法。

凯氏定氮仪测定重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、

凝胶敷料、液体敷料的蛋白质含量

仪器与试剂

1、仪器

K1160全自动凯氏定氮仪，SH520自动消解仪，分析天平 。

K1160全自动凯氏定氮仪

2、试剂  

硫酸(分析纯)，20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，400g/L氢氧化钠溶液，混合催化剂(3gK2SO4、0.2gCuSO4)，0.1mol/L硫酸标准滴定液

实验方法

1、样品制备

凝胶敷料、液体敷料：用5ml针管抽取样品，利用减重称量法称取烘干后混合均匀的样品3.0g(精确至0.1mg)加入消化管，再加入混合催化剂3.2g，沿消化管壁加入浓硫酸10mL。

敷料贴：将敷料贴中的液体组分挤出，收集于试管中，后操作方法与凝胶敷料、液体敷料相同。

2、消解

将加完样品和试剂的消化管放置于消解仪上，盖好排废罩，设定消解仪参数如下表所示：

3、测试

消解完成后，待消化管冷却至室温后取下备用。检查定氮仪各试剂是否充足，同时做仪器空白，待仪器空白稳定后，可将消解好的样品上机测试。定氮仪参数设置如下表所示：

结果与讨论

1、实验结果

实验选取的重组Ⅲ型胶原蛋白敷料贴、液体敷料、凝胶敷料经消解、蒸馏、滴定，得到实验结果如下表所示：

2、结论

本次测试的重组Ⅲ型胶原蛋白液体敷料、凝胶敷料、敷料贴的蛋白质含量及RSD值如上表所示，三种样品的RSD分别为0.78%、0.20%、0.12%，结果平行性良好。

注意事项

对于液体或水分含量较多的凝胶样品，直接升温至420℃消解会造成样品的暴沸，导致样品损失和安全隐患。因此，应先设置较低温度(200℃左右)赶出水分，再逐步升温至420℃消解。