细胞培养好，实验 so easy

一提到细胞培养，这是多少实验者的噩梦，简直……说多了都是泪。

小编经过软磨硬泡终于从师兄师姐那里讨到了细胞培养秘籍，今天就大方一回，分享给大家。

★ 血清与培养基的选择

一般实验血清的添加比例为10%，也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。

对于培养基，建议选择商品化的，比较成熟，稳定性也较好。

★ 培养瓶的选择

目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖，保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。

细胞培养过程中，对于适应能力强的肿瘤细胞，可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T等细胞，建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。

★ 细胞传代

传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。

▶  湿消化法：待细胞变圆，成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化，1000rpm离心5min，弃去上清，用新鲜培养基重悬传代。

▶  干消化法：胰酶浸润后弃去胰酶，待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。

不同细胞的细胞间连接强度不一样，消化时间不同；不同细胞的贴壁能力不同，消化时间不同；消化时应观察细胞形态，避免因过度消化影响细胞活性。

★ 细胞冻存与复苏

当细胞生长状况较好或者代数较早时，需及时大量的冻存。

细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

细胞复苏38℃水浴不时摇动，在1分钟内使其完全融化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。

★ 污染防控

细胞培养最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。

实验中需保持良好的操作习惯，所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。

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