Beckman Coulter声波移液系统与NEB Luna试剂强强联合，支持高通量qPCR和RT-qPCR检测

荧光定量PCR（qPCR）是对核酸序列检测和定量的精 准方法，该方法需要荧光定量仪器，以及作为扩增荧光示踪的双链嵌合染料（例如：SYBR® Green I）和荧光修饰探针（例如：TaqMan 探针”）。

qPCR和RT-qPCR现已广泛用于基因表达研究、SNP分型、杂质筛查、传染病和癌症的分子诊断等。在这些应用中，高通量的qPCR实验能够带来巨大的优势，例如：在基因表达研究中可以同时监测更多的靶标、对照、重复组；在筛查试验中可做到更大规模，在分子诊断中可支持更多病人样本。在96孔板基础上，支持 384孔板的qPCR仪器有效提高了检测通量，然而手动加样建立反应体系，会带来很多不确定因素（例如：加样体积误差、漏加、错加等），并会耗费较长时间的人力。自动化移液系统可有效改善这些问题，提高效率，突破手动操作在整个流程中的瓶颈。

我们在研究中证实，NEB Luna系列qPCR试剂在高通量应用中表现卓 越，并与自动上样设备“贝克曼库尔特公司的Echo525声波移液系统”兼容。该仪器是以非接触移液方式进行小体积移液的设备，专为生命科学和基因组学而设计。使用声波完成移液是通过声波液滴喷射技术（ADE）实现，它将声波聚焦形成固定体积的小液滴（Echo525的液滴为25nL）从母板孔中转移到目标位置。这一技术实现了移液体积从纳升到微升的范围内，精确、快速的转移液体，同时避免传统枪头移液方式带来的交叉污染，并减少耗材和试剂的使用。

NEB Luna 系列 qPCR & RT-qPCR 试剂

Beckman Coulter Echo 525声波移液系统

Echo 525非常适合高通量qPCR体系建立，可以在10分钟内完成384孔板qPCR体系建立，并确保后续的qPCR实验检测灵敏、定量准确，并可减少反应体积。此外，使用 Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR试剂盒，我们为细胞样本的自动化直接 RT-qPCR 分析提供了一个方便的工作流程，在Echo校准母板中进行细胞培养和裂解，提供可用于转移的模板裂解物ADE 介导的反应组装和高通量RT-qPCR分析。

NEB Luna 试剂与贝克曼库尔特声波移液系统和微量反应体系兼容

使用 Beckman®Echo 525声波移液系统，在384孔板中建立10μl、5μl和2μl的Luna通用一步法RT-qPCR 反应体系，对7-log浓度梯度的人源GAPDH进行定量（25ng/μl–25fg/μl Jurkat总RNA），每个浓度重复8次。结果显示：在微量反应体系中，依然展现出良好的线性定量能力和低起始量检测。

Luna Cell Ready一步法RT-qPCR实验流程

Luna Cell Ready一步法RT-qPCR试剂盒提供了直接从细胞（50µl体系可裂解高达10万个细胞）到RNA检测和定量的所有组分。Luna Cell Ready裂解模块整合了DNase I和Luna Cell Ready蛋白酶的功能，仅需15分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组DNA去除。2µl裂解产物（相当于0.2–4000个细胞中的RNA）即可实现20µl体系的RT-qPCR反应。

从Echo校准细胞培养母板到免提取一步法RT-qPCR检测的完整解决方案

A. 将A549（人肺癌）细胞以每孔1000个细胞接种到384孔Echo校准母板中，培养过夜，并使用 Luna Cell Ready裂解模块(NEB #E3032)室温条件下裂解10 分钟。

B. 然后将裂解产物直接转移到Echo建立的Luna通用一步法RT-qPCR反应体系中。

C. 检测24个靶基因的相对表达，每个靶标有6个样品重复（细胞培养源板孔）和2个技术重复，总共 288 个反应。点表示重复（每个靶基因 12 个）；线和数据标签表示靶基因与肌动蛋白（底部）相比的ΔCq。

D. 在类似的实验中，使用 Luna Cell Ready探针一步法RT-qPCR试剂盒(NEB #E3031) 使用探针法荧光定量检测了另外19个靶基因的相对表达。