分析型超速离心（AUC）文献快报-4月刊

Assembly Control at a Low Péclet Number in Ultracentrifugation for Uniformly Sized Nanoparticles

低Péclet分布的均一粒径纳米颗粒在超速离心中的装配控制

发表日期：April 15,2021

DOI：https://doi.org/10.1021/acs.jpcc.1c00143

摘要：

低Péclet状态下的胶体本身具有高扩散特性，即使在超速离心条件下的高密度溶液中，也会以极快的速度形成胶体结晶。而通过沉降过程中引入少量的聚集物，理论上可以减速结晶过程，从而在特定的超速离心条件下调节胶体组装的过程。本实验中,我们将十二烷基硫酸钠稳定的聚苯乙烯纳米颗粒 (粒径分散度为1.07)分散在高离子溶液中。在制备性超速离心机中采用不同的离心速度来控制这些纳米颗粒的沉降和组装。通过分析型超速离心机对沉降的过程进行实时的观察和分析。我们发现在沉降过程中，将3%的聚集物加入到均匀分布的聚苯乙烯纳米颗粒中，超结构晶体序列可以容易的在玻璃体和水晶体之间进行调节。而理论计算补充了相应的实验数据，可以用来解释沉降中聚集物形成的机理。这项工作提供了一种在低Péclet状态下，可调节的制作超结构晶体的新方法。

目的：对胶体溶液进行实时的观察和分析。

仪器型号：Optima AUC

左侧的电镜图片显示不同离心条件下，(上排图片)在水中电荷稳定的聚苯乙烯纳米颗粒和(下排图片) pH 2缓冲液中SDS稳定的聚苯乙烯纳米颗粒的组装情况。右侧图片表示在15 000 rpm (17 100g)条件下，以AUC测定1 % 质量分数的(A：pH 2缓冲液中SDS稳定的聚苯乙烯纳米颗粒)和(B:在水中电荷稳定的聚苯乙烯纳米颗粒)的沉降过程。然后使用Sedfit软件的c(s)模型分析沉降系数分布。在500到700S范围内，箭头所示的右上侧图片显示是否存在聚集物。通过高斯拟合(红色虚线)的峰簇表明聚集物的含量大约为3%。

实验条件：

15,000rpm条件下，使用干涉光检测器对胶体溶液进行检测，然后使用Sedfit软件的c(s)模型分析沉降系数分布

REFERENCE

Schuck,P. Size-Distribution Analysis of Macromolecules by Sedimentation Velocity Ultracentrifugation and Lamm Equation Modeling. Biophys. J. 2000, 78, 1606−1619.

Comparative hydrodynamic and nanoscale imaging study on the interactions of teicoplanin-A2 and bovine submaxillary mucin as a model ocular mucin

Teicoplanin-A2与Bovine Submaxillary Mucin相互作用的流体动力学和纳米成像研究

发表日期：April 12,2023

DOI:https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-2781974/v1

摘要：

糖肽类抗生素经常用于眼科治 疗革兰氏阳性菌感染。抗生素与粘蛋白的聚集性相互作用会导致长时间暴露，并增加抗性的风险。本研究的重 点是评估使用精确的流体动力学和显微镜技术建立眼粘蛋白模型来防御糖肽抗生素替考拉宁。

分析超离心机（SV-AUC）、动态光散射（DLS）和原子显微镜（AFM）。对于较高剂量替考拉宁的混合物（1.25 mg/mL和12.5 mg/mL），在SV-AUC和DLS的流体动力学半径。对于更高的浓度，通过AFM证实了聚集体的存在。

目的：使用分析型超速离心机（SV-AUC）、动态光散射（DLS）和原子显微镜（AFM）研究Teicoplanin-A2与Bovine Submaxillary Mucin的相互作用。

型号：Optimal XL-I

实验数据：

1 mg/mL BSM与（a）0.125 mg/mL替考拉宁（b）1.25 mg/mL替替考拉宁和（c）12.5 mg/mL的混合物的沉降系数分布

实验结果：

BSM和0.125 mg/mL替考拉宁的混合物（图a），各成分之间没有明显的相互作用（混合物的相互作用为~5.4S）。含有1.25 mg/mL替考拉宁的BSM（混合物的含量为5.9S）和含有12.5 mg/mL替古拉宁的BSM有更清晰的变化(混合物的pH值为6.3S）。此外，在粘蛋白的存在下，一些聚集体出现（20-40S）。

对于图b在混合物中约0.9S处的替考拉宁单体峰的消失，表明所有替考拉宁都通过与BSM结合而耗尽。因此我们建议替考拉宁滴眼液配方应以<1.25 mg/mL的浓度输送，以避免潜在的有害聚集并降低抗微生物耐药性的风险。

AUC实验条件：

Buffer 使用PBS 420 µL，样品使用 teicoplanin A2, BSM,及两者混合物各400 µL，20.0°C， 47500 rpm，24 h离心，使用SEDFIT进行数据分析。

Bibliography

Chun, T., Pattem, J., Gillis, R.B., Dinu, V.T., Yakubov, G.E., Corfield, A.P. and Harding, S.E., 2023. Comparative hydrodynamic and nanoscale imaging study on the interactions of teicoplanin-A2 and bovine submaxillary mucin as a model ocular mucin.

A self-assembled trimeric protein vaccine induces protective immunity against Omicron variant

自组装三聚体蛋白疫苗可诱导针对Omicron变体的保护性免疫

发表日期：September 8,2022

DOI:https://doi.org/10.1038/s41467-022-33209-9

摘要：

最近出现的 Omicron (B.1.1.529)突变株已迅速超过Delta成为主要的传播SARS-CoV-2突变株，因为它具有更高的传播率和免疫逃逸能力，从而导致接种疫苗的个体感染激增。因此，迫切需要针对Omicron变体的新一代 SARS-CoV-2疫苗。在这里，我们开发了一种名为RBD-HR/trimer的亚单位疫苗，它通过直接将Delta变体（包含L452R和T478K）衍生的RBD序列与SARS-CoV-2 S2亚基中的HR1和HR2以串联方式连接起来自组装成三聚体。在多个动物模型中，用MF59样水包油佐剂配制的RBD-HR/三聚体疫苗接种引发持续的体液免疫反应，产生高水平的针对Omicron变体的广谱中和抗体，还在体内诱导强烈的T细胞免疫反应。此外，我们的RBD-HR/三聚体疫苗在两次mRNA疫苗接种后显示出对Omicron 变体的强烈增强作用，其特点是能够用于初免-加强方案。在小鼠和非人类灵长类动物中，RBD HR/三聚体疫苗接种可以提供针对Omicron和Delta变体的活病毒攻击的完全保护。结果使RBD-HR/三聚体疫苗成为预防SARS-CoV-2 的有前途的下一代候选疫苗，值得在临床试验中进一步评估。

仪器型号：Beckman Coulter ProteomeLab XL-I分析超速离心机

重组 RBD HR/三聚体蛋白的分析超速离心 (AUC) 测定

AUC实验条件：

1. AUC 测定是在 Beckman Coulter XL-I 分析超速离心机中使用双通道中心件进行的。

2. RBD-HR/三聚体蛋白在由 20 mM Hepes pH 7.0 和 150 mM NaCl 组成的缓冲液中制备，以 A280 = 0.8 吸光度单位的浓度装载样品，并在 4°C 下孵育 1 小时。

3. 在 18 °C 下通过吸光度检测收集数据，转子速度为 207,604 × g。

4. 使用 SEDFIT 程序对 SV-AUC 数据进行分析，并将其拟合到连续 c(s) 分布模型以确定蛋白质的分子量。

REFERENCE

He, C., Yang, J., Hong, W. et al. A self-assembled trimeric protein vaccine induces protective immunity against Omicron variant. Nat Commun 13, 5459 (2022).