双向免疫扩散法是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。即可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇,在比例适当处形成沉淀线。根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行定性分析,也可用于抗体的半定量检测。
将可溶性抗原(如小牛血清)与相应抗体(如兔抗小牛血清的抗体)混合,当两者比例合适并有电解质(如氯化钠、磷酸盐等)存在时,即有抗原―抗体复合物的沉淀出现,此为沉淀反应(precipitin reaction)。如以琼脂凝胶为支持介质,则在凝胶中出现可见的沉淀线、沉淀弧或沉淀峰。根据沉淀出现与否及沉淀量的多寡,可定性、定量地检测出样品中抗原或抗体的存在及含量。免疫学的一些测定方法即基于此特性。
双向扩散法(double diffusion),Z早由Ouchterlony创立,故又称Ouchterlony法。琼脂凝胶是多孔的网状结构,大分子物质可以自由通过,这种分子的扩散作用使分别两处的抗原和相应抗体相遇,形成抗原―抗体复合物,比例合适时出现沉淀。由于凝胶透明度高,可直接观察到复合物的沉淀线(弧)。沉淀线(弧)的特征与位置取决于抗原相对分子质量的大小、分子结构、扩散系数和浓度等因素。当抗原、抗体存在多种系统时,会出现多条沉淀线(弧)。依据沉淀线(弧)可以定性抗原。
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