考马斯亮蓝染色步骤

考马斯亮蓝染色步骤

考马斯亮蓝染色法也称考马斯蓝法(coomassie blue staining)又称Bradford法。是测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。下面上海远慕生物技术就着重介绍下考马斯亮蓝染色法原理。

考马斯亮蓝染色步骤：

1 电泳结束后，切取少量含有MARK蛋白以及少许样品的小部分凝 胶进行染色，其余部分用保鲜膜包好，放在4℃冰箱保存。 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时 间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近， 在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对Z终的染色效果产生负面影响。

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更换脱色液2-4 次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染 色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2 小时后即可出现。 注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附 在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。

4 完成脱色后，用ddH2O浸泡，至于未染色凝胶长度相等时，参照 MARK 蛋白，与未染色凝胶对比，切下所需蛋白成分的凝胶，收集起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。