Hoechst 33258/ Hoechst 33342：细胞核染色的重要染料

产品介绍

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

技术原理

DNA 结合：Hoechst能够特异性地与双链DNA结合，通过插入到DNA的小沟中，形成稳定的复合物。这种结合方式使得染料的荧光特性发生改变，在特定波长的激发光下发出蓝色荧光。

荧光特性：Hoechst在紫外光或近紫外光激发下发出蓝色荧光，其激发波长通常在350 nm左右，发射波长在460nm左右。这种蓝色荧光具有较高的亮度和对比度，能够清晰地显示细胞核的形态和结构。

Hoechst 33258/ Hoechst 33342的区别

Hoechst 33258在活细胞中DNA的AT序列富集区域的小沟处与DNA结合，广泛用于细胞凋亡检测，染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。两者区别不大，但是Hoechst 33342对细胞的毒性作用更小一些，因此一般Hoechsts 33258用于细胞固定后再染色，而Hoechst 33342则可以对活细胞直接进行染色。

使用方法

1. 用PBS或合适的缓冲液制备0.5 - 10 μg/mL Hoechst 33258染色液。
2. 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 
3. 在 37℃培养细胞10 - 20 min。
4. 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

结果展示

正常细胞的细胞核被Hoechst染色后，呈现出明亮的蓝色荧光。细胞核的形态和结构清晰可见。

常见问题

Q：如何做到同时染色溶酶体和细胞核的？

A：建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342染色细胞核，这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。

Q：DAPI和Hoechst染料相当类似，如何二选一？
A：DAPI是非常通用的蓝色荧光染料，用于细胞核复染。对固定和透化的细胞/组织，具有非常明亮的细胞核标记。然而，此染料被认为是半渗透至不渗透的染料，用于活细胞染色的结合不一致。Hoechst 33342是一种细胞膜渗透性的染料，具有同DAPI的结合机制和荧光特征。非常适合用于活细胞成像，效果就如同DAPI用于固定细胞染色。

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