【微课堂】泰林过氧化氢灭菌生物指示剂芽孢计数方法

将热激后10^-1试管转移至生物安全柜中，于涡旋混匀仪上震荡30s，用移液枪吸取1mL菌悬液，加入到另一支含有9mL无菌纯化水试管中震荡30s，记为10^-2。按照此方法依次稀释至10^-3、10^-4（稀释级别按制造商提供的芽孢数量而定）。

取10^-4稀释倍数的试管（理论芽孢浓度在30~300cfu/mL范围内），用移液枪吸取1mL稀释液，置90mm的无菌平皿中，注入15 ~20mL温度不超过45 ℃融化的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），混匀，同一稀释级制备两个平板。

等待琼脂凝固后，倒置于培养箱中55~60℃培养48h后分别点记两个平板的菌落数，并计算两个平板的平均菌落数。

平板上菌落应呈白色或黄色、边缘整齐、表面光滑有光泽、圆形凸起，无杂菌。计数结果在产品标定值的50%～300%范围内。

上述方法适用于泰林不锈钢载体的过氧化氢灭菌生物指示剂芽孢计数（片式/自含式）。生物指示剂芽孢计数过程中，可能由于人员、计数方法、实验材料、仪器设备、环境等因素，造成计数结果不准确。

我司研究结果表明，稀释液会对计数结果产生影响，如使用0.1%蛋白胨水溶液、含0.05%吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液、含0.05%吐温80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为稀释液时，芽孢计数结果偏低；如在计数操作过程中未对产品进行超声洗脱，也会导致芽孢计数结果偏低。

GB18281.1要求，在生物指示剂有效期内，用户或第三方机构使用制造商给出的方法所检测出活菌的数量，应介于生物指示剂产品标定值的50%～300%之间。此外，根据ISO 11138-7要求，在验证生物指示剂含菌量时，用户应遵循制造商所提供方法和材料的建议，因为方法和材料的差异可能对结果有重大影响。