超滤离心管使用需掌握哪些知识点

　　超滤离心管使用需掌握哪些知识点

　　离心管是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。超滤离心管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品。

　　选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3.比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。新买来的超滤是干燥的，使用加入超纯水，水量过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液，超滤管需要插在冰上预冷。

　　超滤离心管是否要预处理：

　　超滤离心管通常不需要预处理即可使用，不过对于蛋白质样本处理，特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附小化，但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失，大多数情况下，在浓缩稀蛋白溶液之预处理柱子可以提高回收率，因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用*高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上，蒸馏水冲洗柱子，再用蒸馏水离心一次以除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用，需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。

　　如何使用超滤心离心管：

　　1. 使用角转子加到超滤装置上，样本量为15 毫升(Anavo Ultra-15)。

　　2. 将带盖过滤装置放入离心机转子内; 用一个类似的装置来平衡。

　　3. 使用定角转子时，将薄膜面板朝上定位，旋转 5000 xg，旋转 30 分钟。

　　4. 为了回收浓缩的溶质，在过滤装置的底部插入一个移液管，通过左右扫动的方式将样品抽离，以总回收率。超滤液可贮存在离心管中。

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