人B7同源体3（B7-H3）试剂盒（ELISA）

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人B7同源体3（B7-H3）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人B7同源体3（B7-H3）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响Z后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

试剂盒组成

微孔酶标板

标准品

样本稀释液

检测抗体-HRP

20×洗涤缓冲液

底物A

底物B

终止液

封板膜

说明书

自封袋

备注：

1.标准品浓度依次为：32、16、8、4、2、0ng/mL

2.经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过Zda标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

注意事项

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作步骤

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

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