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- 【导读】费氏弧菌发光杆菌沙土保藏法操作步骤:(1)取河沙加入10%稀盐酸,加热煮沸30分钟,以去除其中的有机质。(2)倒去酸水,用自来水冲洗至中性。(3)烘干,用40目筛子过筛,以去掉粗颗...
费氏弧菌发光杆菌沙土保藏法操作步骤:
(1)取河沙加入10%稀盐酸,加热煮沸30分钟,以去除其中的有机质。
(2)倒去酸水,用自来水冲洗至中性。
(3)烘干,用40目筛子过筛,以去掉粗颗粒,备用。
(4)另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土,加自来水浸泡洗涤数次,直至中性。
(5)烘干,碾碎,通过100目筛子过筛,以去除粗颗粒。
(6)按一份黄土、三份沙的比例(或根据需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)掺合均匀,装入10×100mm的小试管或安瓿管中,每管装1g左右,塞上棉塞,进行灭菌,烘干。
(7)抽样进行无菌检查,每10支沙土管抽一支,将沙土倒入肉汤培养基中,37℃培养48小时,若仍有杂菌,则需全部重新灭菌,再作无菌试验,直至证明无菌,方可备用。
(8)选择培养成熟的(一般指孢子层生长丰满的,营养细胞用此法效果不好)优良费氏弧菌发光杆菌菌种,以无菌水洗下,制成孢子悬液。
(9)于每支沙土管中加入约0.5ml(一般以刚刚使沙土润湿为宜)孢子悬液,以接种针拌匀。
(10)放入真空干燥器内,用真空泵抽干水分,抽干时间越短越好,务使在12小时内抽干。
(11)每10支抽取一支,用接种环取出少数沙粒,接种于斜面培养基上,进行培养,观察生长情况和有无杂菌生长,如出现杂菌或菌落数很少或根本不长,则说明制作的沙土管有问题,尚须进一步抽样检查。
(12)若经检查没有问题,用火焰熔封管口,放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。
(13)需要使用费氏弧菌发光杆菌菌种,复活培养时,取沙土少许移入液体培养基内,置温箱中培养。
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- 2004-09-17 09:23:05
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