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- 【导读】1、什么是细胞培养培养的细胞由于细胞增殖,数量增加,细胞难以继续生长繁殖,需要进行分瓶培养,将培养的细胞分散,以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养,一...
1、什么是细胞培养
培养的细胞由于细胞增殖,数量增加,细胞难以继续生长繁殖,需要进行分瓶培养,将培养的细胞分散,以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养,一般细胞可传代10-50代
2、细胞的贴壁过程
3、培养细胞的一代生长过程
①潜伏期:细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间
二倍体细胞系该段时间较长,大概为24-96h;连续细胞系时间短,大概10-30min
②指数生长期:细胞增殖Z旺盛时期,此时进行细胞实验较佳
指数生长期持续3-5d后,随细胞数量不断增多,生长空间日趋减少,细胞相互接触汇合成片,呈现接触YZ。而恶性细胞则无接触YZ现象;癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度YZ。
③停滞期:细胞数量达到饱和密度后,细胞与营养液的交换面积减少,代谢产物积累,pH下降细胞停止增殖,进入停滞期。此时应该进行细胞传代,但是得传1-2代细胞才能恢复。
4、细胞传代的一般步骤
a、悬浮细胞
可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用离心法后,加入新培养基后再吹打分散进行传代
b、贴壁细胞
①实验准备,超净台喷洒酒精,紫外照射30min。准备好培养瓶/皿,离心管,10%DMEM,0.25%胰酶,D-hanks液等,带上手套,口罩等
②倒去旧培养基,用D-hanks液清洗一遍,去除沉积的死细胞等
③加入2ml0.25%胰蛋白酶消化液,消化2~3min,倒置显微镜下观察,待细胞单层收缩突起出现空隙时,倒去酶液。
④加入1~2滴管含有血清的培养液,反复吹打细胞,使其成细胞悬液
⑤以1:2或1:3进行分装,补充新鲜培养基,并在培养瓶上做好标记,注明代号、日期,轻轻摇匀,37℃CO2培养箱培养。
⑥细胞培养24h后,即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况
5注意事项
①传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次Z好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
②传代时间的掌握:每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。
③消化时间的掌握
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- 2004-09-27 09:23:05
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