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酶免电扩散测定技术
一,酶联免疫电扩散测定技术的原理酶联免疫电扩散是免疫电扩散(Immunoelectrodiffusion,简称IED)与免疫酶技术相结合的样新技术,其原理在于通过免疫电扩散,抗原与该抗原相应的IgG快速形成免疫复合物,接着用酶标记的抗IgG免疫球蛋白与免疫复合物孵育结合,然后用底物显色。酶联免疫电扩散技术增加了免疫电扩散的灵敏度,对分析复杂的抗原反应和不同类型的免疫球蛋白,都有作用。二,酶联免疫电扩散测定技术的程序1,器材与设备电泳仪(包括电泳槽);醋酸纤维薄膜(2.5cm×17cm);微升吸管;大号培养皿等实验用玻璃器皿。2,材料与试剂可溶性抗原溶液;该抗原相应的兔抗血清;HRP标记的抗兔IgG抗体,其中特异性抗体蛋白的浓度为1.25mg/ml;0.1mol/LpH8.2缓冲液;0.2%Haemosol溶液;0.1mol/LPh7.6Tris缓冲液;0.01mol/LpH7.2PBS;洗涤液(85gNaCI,500ml缓冲液,蒸馏水加至1000ml);底物与供氢体溶液(H2O2与DAB-4HC1)。3,实验程序⑴在醋酸纤维薄膜上用软铅笔划好点样线,每条点样线距离膜边3cm,对距11cm,在每条点样线中间用软铅笔划好点样点。⑵在0.1mol/LpH8.2缓冲液中浸湿,滴干水,但要保持湿润。⑶用微升吸管点样,一点加抗原3ul(或1ul),另一点加兔抗待测抗原的血清15ul(或5ul),每份点样的抗原浓度为0.001-50ug.⑷电泳条件。用湿滤纸搭桥,电泳缓冲液为0.1mol/LpH8.2缓冲液,电流强度为1mA/cm,电泳时间为2h,抗原端接负极。⑸电泳完毕,将薄膜浸入洗涤液30min,去多余的血清蛋白与游离抗原。⑹将薄膜浸入0.01mol/LpH7.2PBS中,振荡洗涤30min,取出薄膜,滴干余水。⑺将酶标记抗体以1:50稀释。⑻用稀释的酶标记抗体在室温孵育2h.⑼在0.2%Haemosol溶液中振荡洗涤15min.⑽在Tris缓冲液中振荡浸洗30min.⑾在底物溶液中浸1min后,观察显色结果。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-11-09 09:23:09
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