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ELISA试剂盒问题解析
设计ELISA复孔检查时,是对同一个样品作两次稀释,再分别加到板上的两个孔,还是只稀释一次,然后吸取两次分别加到两个孔?前者似乎把稀释时的误差也考虑到了,但做出来的结果两个孔相关挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法?
为了减小误差,Z好是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问,我公司技术人员是这样解说的:
1.前者测的是稀释和移液的误差,后者只有移液误差。
2.一般都是稀释一次,分两孔吧。同浓度的分复孔。
3.由于是从同一原液稀释,一般不考虑稀释误差(稀释误差是存在的),都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是一一稀释,这样可以使稀释误差减小)。
4.复孔是为了排除移液体积,板的影响,以及其他系统误差的,要求复孔的浓度是一致的。稀释后分孔能满足此要求,一一稀释不能。ELISA操作技巧
1.操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,要先查看水育箱温度,ELISA试剂盒是否符合要求。
2.正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次序要与说明书一致,否则可导致结果错误,实验重复性差。
3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数,洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流,造成孔问污染,导致假阴性或假阳性。
4.要保证加液量一致我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。
5.显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-11-29 09:23:26
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