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- 【导读】细胞周期检测染料:可用于细胞周期检测的荧光染料有碘化丙啶(Propidium,简称PI)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole...
细胞周期检测染料:
可用于细胞周期检测的荧光染料有碘化丙啶(Propidium,简称PI)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,简称DAPI)、Hochest、7氨基放线菌素(7-Amino-ActinomycinD,简称7AAD)等。
细胞周期PI法原理:PI法是较常见的一种周期检测方法。PI是一种双链DNA的荧光染料,与双链DNA结合后可产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可进行细胞周期分析。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
细胞周期检测步骤:
1.细胞样品的准备:
收集细胞,用1ml预冷PBS洗1遍,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
2.细胞固定:
加入1ml预冷的70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4度固定2小时或更长时间(固定12-24小时可能效果更佳)。1000g离心3-5分钟,沉淀细胞(如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或加大离心力)。弃上清,用用1ml预冷PBS洗1遍。
3.PI染色:
每个样品用0.5ml染色缓冲液(或PBS)重悬,加入25ulPI染色液(20×)、10ulRNaseA(50×)。37度避光温浴30分钟。
4.流式检测:
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-12-01 09:23:08
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