细胞培养板的选择-细胞分布不均及解决办法

问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊？我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊？答：请问你的细胞是如何混匀的？是滴管吹打还是振荡培养板？如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多！自己可是试试！周边一般是相对会多一点，但是中间的数量也不会很少啊~~铺板的时候我也没有特异去振荡培养板。大概是板子的质量问题吧或者是不是铺板时候的细胞密度太低了？我用的corning的板。一个好办法：在你培养种板之前，把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出，种入细胞时力量要轻，可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中，培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡，否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。我今天把培养板放入培养箱里几个小时，适当的把细胞密度加大了一下，另外多加了一点培养液，今晚看细胞铺的挺好的。我认为有两种可能解决你问题的办法:1.加入前吹打均匀;2.从多孔板侧边或底边缓慢加入。我在做原代培养时也遇到过这种情况，我一直以为培养皿铺胶不均匀会导致这种现象，因为混匀的血管段加入到培养皿中时，在相差显微镜下血管段均匀分布在培养皿中，24h后贴壁的血管段就是周边多，中间相对少些。下次我要试试hkqu战友的方法看能否改变这种现象。谢谢指点！这种现象很正常呀，不知你仔细观察过没有，孔直径愈小，这个现象越明显，我试过，24、96孔板这种现象不可避免，因为液体的附壁使得孔内培养液不是成一个液平面，而是周边高，就像凹镜一样，而使用这两种孔板由于需要加干预等原因而不能加足量培养液，使得细胞随培养液一起出现“边集”现象，如果为了使孔ZY也有均匀细胞而增加接种细胞数量的话，这要看你需要观察何种指标，如果是MTT，免疫组化的话会因为细胞成层而影响结果。赞成hkqu战友的建议，个人认为消化细胞时要注意吹打均匀，避免细胞成团，而且孔内培养液量要足够，我一般接种时加足量培养液，加干预时换一次液，干预液加培养液量等于接种时培养液量，这样的话“边集”现象会有所改观，不妨一试。我想我们做课题，实验的目的是为了验证或探索某些理论，而不是要所谓的“好看”，“美”。还记得鲁迅先生的文章《藤野先生》一文吗？我们很多年以前学过的，藤野先生对鲁迅先生说得话大家不防重温一下，我想这正是我们要学习的地方。我做的是空斑形成实验，Z好是细胞铺成均匀的一层，昨天接种病毒时大部分孔都还好，个别的不太均匀。现在我细胞实验也做了一段时间了，但在实验中平行组的差距还是比较大。有时候一组数据大多是差不多的，偏偏会跳出一个相去甚远的数据。我想应该不是我细胞加入时的问题，因为我的组间差距大是出现在加样的组中，而对照组的数据却相当的稳定。另外，我的样品是完全均匀的液体，照理应该是不会出现上述问题的。我也出现了这样的问题。我加入细胞的时候是用吸管边吹打边用一毫升的枪加入12孔板中的，可是组内差异仍然很大，想请教一下大家加细胞的时候都有什么方法呀？我觉得有几点：1.细胞消化后吹打成单细胞悬液很关键！保证分板时每个孔的细胞数目是一致的！2.当然还有你的处理因素各个孔之间的平行也很重要，比如说加药时，药物稀释后混匀，保证每个孔的浓度是一致的！3.再者加细胞和药物时，要试验组和对照组一块轮流加，避免加样先后顺序导致细胞密度和药物浓度的差异！！吹打已经是均匀了，但是铺板，6孔，24孔总有些不均匀的哦，有点爱往中间集中。而且明明计数好了铺了，长一两天，各个孔密度就有点不一样，对检测有影响，能指教一下，有良策吗？1.如果用巴氏吸管铺的话，每次吸取的量不要太多，因为吸管内的细胞会自动向下沉，往往diyi开始几个孔细胞数多，经常均匀细胞悬液，加液走S型路线。2.如果用移液器的话，tips要处理下，把去掉避免损伤细胞，这样每一次取液对应一个孔。用tip一对一孔加入比较准确。但也要注意混匀悬液。3.设立平行组，n要足够大（可以计算一下）。4.铺板后不要摇，因为摇动会导致细胞向中间聚集。Z好铺板一次搞定。铺板后不要做圆周的晃动，做十字晃动，即上下左右晃动，否则会使细胞旋到当中去。移液器的枪头沿着培养板壁加，就不会集中到中间了。

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