瑞氏染液使用方法 瑞氏染液使用方法

瑞氏染液使用方法

使用方法：

瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlemblue）和酸性染料黄色伊红（EostmY）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇

ME（瑞氏染料）----→M++E-

在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制

一、瑞氏染液配制：

瑞氏染料830gm或1g

甲醇（AR）500ml或600ml

1）先称干燥（事先放入温箱干燥过宿）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

2）再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（Z好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

3）存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

二、缓冲液作用：

1）染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

2）缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH一般在6.4~6.8，

3）偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

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