Ultimate® SEC色谱柱的使用说明书

UltimateSEC色谱柱性能介绍
UltimateSEC色谱柱是硅胶基质的体积排阻色谱柱，其色谱填料为高纯度、具有良好稳定性的硅胶微球表面键合亲水性高分子聚合物。月旭公司采用特殊的表面修饰技术，确保了该填料具有良好的稳定性和批次之间的较好重现性。
UltimateSEC填料采用独特的化学键合技术，在硅球表面键合了亲水性聚合物以及亲水性二醇基官能团。双重键合机制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物样品的非特异性吸附极小，广泛应用于水溶性聚合物及生物大分子的分离和测定。

UltimateSEC色谱柱性能介绍

UltimateSEC色谱柱使用步骤：
1.将UltimateSEC色谱柱连接在HPLC系统上；
2.设置流速在0.8-1.0mL/min，首先用纯水相平衡至少40min，然后用所使用的有机溶剂平衡至少30mi；
3.使用完毕后，先用纯水相冲洗色谱柱至少40min以上，然后用高比例的有机相冲洗至少30min。

UltimateSEC色谱柱使用注意事项
1.使用前，请把色谱柱用纯水冲洗40-60个柱体积，以确保柱填料能够充分被润湿，防止色谱柱在使用过程中造成固定相塌陷；
2.色谱柱在用纯水流动相分析时，需要充分地用纯水流动相平衡色谱柱，待基线充分平稳后进样分析；
3.由于该类型色谱柱一般用的流动性是纯水相的缓冲盐，因而色谱柱在使用完以后需要用纯水流动相充分冲洗色谱柱，以保证缓冲盐被充分的清除，防止缓冲盐对色谱柱固定相造成的伤害；
4.长时间不使用色谱柱时，请将该类型色谱柱保存在高比例的有机溶剂-水溶液中，一般有机溶剂的比例为90%。

UltimateSEC色谱柱样品与流动相
为了避免色谱柱的堵塞，所有的流动相和样品都必须用0.45μm或0.2μm的滤膜过滤后使用。UltimateSEC柱可以使用水或有机溶剂和水的混合物，如甲醇(或乙腈)的水溶液等作为流动相。流动相在使用前必须脱气处理。

UltimateSEC色谱柱的保养
1.溶剂
新的UltimateSEC柱中的流动相是90%的乙腈水溶液。长期不用其色谱柱内硅胶填料可能会干涸。此时需要用10-20倍柱体积的超纯水进行冲洗以确保色谱柱的重新活化。然后可根据所需的流动相平衡色谱柱。流速由0.2mL/min逐渐升高至所需的流速，直至基线稳定为止。如果柱压和基线波动较大，这可能是气泡进入了色谱柱。这时可用较高流速冲洗色谱柱2-5min，例如对于7.8×300mm的色谱柱可采用流速2.0mL/min。
2.pH
为了获得Z佳的分离效果和延长柱的使用寿命，尽量使用pH在2-8.5范围内的流动相。
3.压力
UltimateSEC柱可在高至6000psi的压力下使用，但正常的操作压力应当低于2000psi。长时间在高压下使用会损坏色谱柱和输液泵。一般情况下，柱压会随着色谱柱使用时间的增加而逐渐升高。此时建议将色谱柱反接后用合适的溶剂进行清洗、重新活化。
4.温度
为了获得Z长的使用时间，Z佳操作温度为10-30℃。

UltimateSEC色谱柱的再生步骤
UltimateSEC色谱柱的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化，越是生物大分子，越需要经常地对柱子进行再生，因为它们往往因为具有较大的体积而堵塞色谱柱，如果使用过程中发生柱压突然升高或者色谱峰的峰型会与柱子发生置换。可以通过注射核糖核酸酶来测试柱子的置换情况。如果核糖核酸酶的峰有拖尾，那么柱子需要做以下处理：
将色谱柱与检测器断开；把柱子流路方向反过来，以高比例有机相(甲醇或乙腈)以0.2mL/min的流速冲洗一整夜，用30-50倍柱体积的超纯水将色谱柱冲洗干净。再生之后按照正常方向使用。

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