- 湖南大学化学化工学院-贝士德仪器 先进吸附分离技术联合实验室挂牌!
- 贝士德仪器-CIBF2024圆满收官!
- 北京大学医学部NTA技术应用及新机体验沙龙活动圆满完成
- 【培训课程】等温滴定量热仪(ITC)培训(北京)课程报名通道
- 51劳动节丨致敬劳动者!节日快乐!
- 光学方案 | Girl Gang Garage利用三维扫描解决方案ZEISS T-SCAN hawk 2进行定制汽车改造
- 三思纵横试验机助力第五届全国复合材料结构力学青年科学家论坛圆满成功
- 放假通知 | CATO祝您五一劳动节快乐!
- 【新品解析】Mastersizer 3000+ 软实力攻克硬骨头
- 奥玛环素(Omadacycline):新型四环素类抗生素及其杂质研究进展
- 期待推新,重温陪伴——寻找您实验室里的德国耶拿TOC分析仪
- bruker rtespa - 150探针,购买找上海尔迪仪
- 保健品需求扩大,真空冷冻干燥机助力生产制作
- 来源:内容来源于网络 浏览量:1174次
- 【导读】单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.Khler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。单克隆抗体的制备过程主要有以下六...
单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.Khler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。
单克隆抗体的制备过程主要有以下六个环节,具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。
下面详细介绍单克隆抗体制备过程每一步的做法。
1、抗原制备
制备单克隆抗体的免疫抗原,从纯度上说虽不要求很高,但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加,同时可以减轻筛选的工作量。因此,免疫抗原是越纯越好,应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。
2、免疫动物的选择
根据所用的瘤细胞可选用小鼠和大鼠作为免疫动物。因为,所有的供杂交瘤技术用的小鼠瘤细胞系均来源于BALB/c小鼠,所有的大鼠瘤细胞都来源于LOU/c大鼠,所以一般的杂交瘤生产都是用这两种纯系动物作为免疫动物。但是,有时为了特殊目的而需进行种间杂交,则可免疫其他动物。种间杂交瘤一般分泌抗体的能力不稳定,因为染色体容易丢失。就小鼠而言,初次免疫时以8-12周龄为宜,雌性鼠较便于操作。
3、免疫程序的确定
在设计免疫程序时,应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射,也采用足垫、皮内、滴鼻或点眼。Z后一次加强免疫多采用腹腔或静脉注射,目前尤其推崇后者,因为可使抗原对脾细胞作用更迅速而充分。在Z后一次加强免疫后第3天取脾融合为好,
注:体内免疫法适用于免疫原性强、来源充分的抗原,对于免疫原性很弱或对机体有害(如引起免疫YZ)的抗原就不适用了。如果制备人单克隆抗体几乎不大可能采用体内免疫法。因此,针对这些情况,可采用体外免疫。所谓体外免疫就是将脾细胞(或淋巴结细胞,或外周血淋巴细胞)取出体外,在一定条件下与抗原共同培养,然后再与瘤细胞进行融合。
4、免疫前的准备
佐剂是非特异性免疫增强剂,与抗原一起注射或预先注射入机体内时,可增强机体对抗原的免疫应答。
5、免疫
用佐剂和抗原按照1:1的比例进行混合,混合后进行磨合。磨合可以使用玻璃针管反复推拉,至佐剂抗原滴入水中既不会产生大面积油花,也不会分层。取一定量佐剂抗原对免疫动物进行分段多次注射。
注意:在注射的时候要小心,不要感染免疫动物。
6、细胞杂交与选择培养
(1)杂交筛选:细胞杂交之前,要分别准备好的B细胞悬液和小鼠瘤细胞。免疫后的小鼠在无菌条件下破碎,将B细胞悬浮在没有血清的培养液中并洗涤3次去掉小鼠的血清。细胞用培养液洗涤2-3次,把两种细胞合并在同试管中,用50%的聚乙二醇作为融合剂,在37℃条件下融合1-2min。用培养液缓慢稀释,除去PEG,将存活细胞分散至HAT选择培养板中。融合后的细胞在培养皿上用HAT培养液(培养液中含10%-20%胎牛或小牛血清和HAT)在37℃,5%CO2进行培养。形成可用的细胞克隆后经过几次更换培养液后进行抗体活性检测(见抗体检测)。分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养,检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体。
注意:在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常需要加入饲养细胞使之繁殖。常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨噬细胞。
(2)细胞培养:将筛选出来的细胞直接注射到小鼠的腹部,培养3-4天。吸取培养好小鼠的腹水,将抽取的腹水进行梯度离心就可以分离到纯净的单克隆抗体。
注意:细胞也可以在体外进行培养,不过体外培养对环境要求极高,很容易就感染了菌株从而造成整个实验的失败。在抽取腹水的时候不要多次抽取,尽量一次抽取成功,否则很容易感染菌株。
以上为单克隆抗体的制备过程详细解释。索莱宝提供整个实验全部生化试剂、耗材及设备销售,欢迎老师、同学选购。如果想要了解更详细实验,请参考索莱宝实验ZT:单克隆抗体制备。
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-08-30 09:23:16
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
TC4与TA2在实验室反应釜中使用的优缺点比较2004-07-06 08:51:52
主要介绍TC4及TA2在实验室反应釜制造中的相同点及优缺点TC4为钛合金,TA2为纯钛,这两种材质在实验室反
-
实验室迷你离心机的原理及应用2004-07-05 09:14:03
医用实验室迷你离心机主要用于医疗实验、医院、制药企业、生物研究所、精细化工等。 实验室迷你离心机的工作
-
实验室建设规划的三个基本环节2004-07-19 09:04:23
实验室建设规划的基本程序分为方案设计、初步设计和施工图设计三个环节。实验室建设方案设计是根据实验室
-
实验室家具和普通家具有哪些区别,两者可以替换吗2004-07-19 09:04:23
实验室家具可以用一般的家具代替吗?都是家具,问什么实验室家具那么贵呢?相信很多人都会有这个疑问,现
-
食品微生物实验室规划设计以及要求2004-07-19 09:04:23
一、选址:1. 实验室应选择在清洁安静的场所,远离生活区,锅炉房与交通要道;2. 实验室应选择在光
-
实验室设计指南2004-07-19 09:04:23
一.实验室基本要求 公司是专业生产和销售实验台、通风柜、中央实验台、药品柜等实验室家具的实验室设
-
氢化釜实验室应急预案2004-08-07 09:10:57
氢化釜实验室应急预案氢化釜实验室因存放氢气和经常高温高压使用氢气,如有以下特殊情况危及氢化釜实验室安全,为
-
实验室反应釜shou选威海嘉毅化工机械2004-08-07 09:10:57
实验室反应釜首选威海嘉毅化工机械,制造精品、精益求精、人性化的设计、让客户百分百满意!力争打造实验室反应釜行
-
实验室超纯水机使用需要注意什么2004-08-08 18:04:02
实验室超纯水机使用需要注意什么? 纯水机就是其中一种不错的净水设备。在日常使用中需要做好日常维护工作,才能
-
生物安全实验室设计与施工应注意事项2004-08-09 09:15:49
实验室工作人员在处理病原微生物、含有病原微生物的实验材料或寄生虫时,为确保实验对象不对人和动植物造成生物
详解单克隆抗体的制备过程(索莱宝实验室)
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi