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- BL21(DE3)感受态细胞说明书
BL21(DE3)CompetentCell
BL21(DE3)感受态细胞
目录号:YJ0809
保存条件:-80℃保存。
组分说明
Cat.No.YJ0809A
Size10×100μl
BL21(DE3)CompetentCell10×100μl
ControlDNApUC19,0.1ng/μl10μl
产品简介
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于
DNA的热击转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白,该菌株是以T7RNA聚合酶为
表达系统的外源基因蛋白GX表达的宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受λ噬菌体
DE3区的lacUV5启动子调控,该区整合在BL21染色体上。使用pUC19质粒检测,转化
效率可达107
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途
注意事项
1.感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可多次冻融和放
置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2.转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3.包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。
操作步骤
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量
的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,
倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意:1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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- 2004-08-31 09:23:06
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