猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲变异株（PRRSV HuN4） 质粒核酸标准物质

Plasmid DNA Reference Material of PRRSV HuN4 cDNA Fragments

    本标准物质是包含猪繁殖与综合症病毒美洲变异株（PRRSV HuN4）基因组 M 基因及 N 基因的 线性化质粒。可用于方法建立、标准曲线绘制、工作标准赋值、方法确认与评价、产品质量控制等。 

一、 样品制备

    本标准物质将猪繁殖与综合症病毒美洲变异株（PRRSV HuN4）基因组 cDNA 中包含 M 基因及 N 基因的一段保守序列（979bp）克隆至 pUC18 质粒载体中，经过质粒提取，EcoRⅠ单酶切线性化， 纯化及质量检测，用 TE 缓冲液稀释并混匀后进行分装。

二、 溯源性及定值方法

    本标准物质采用JD定量方法-数字 PCR 方法以 8 家实验室合作定值的方式测定质粒核酸拷贝 数浓度特性量值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的JD定量测量方法和经检定/校准的容量 计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符 号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。

三、 特性量值及不确定度

    标准值的不确定度考虑了由定值、样品均匀性和稳定性引入的分量。

四、 均匀性及稳定性评估

    参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法，按照统计学要求随 机抽取样品，进行均匀性评估，评估结果表明，样品均匀性良好；采用数字 PCR 检测方法，对样品 进行长期和运输稳定性评估，评估结果表明，样品在规定的保存条件下稳定性良好，并应在干冰或 冰袋环境中运输。

    本标准物质最小取样量为 5 μL，只有在遵循最小取样量的前提下，标准物质的特性值及其不确

    定度才是有效的。本标准物质自定值日期起有效期暂定 1 年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质 的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、 包装、贮存及使用

    1.包装、储存及运输：本标准物质采用 0.5 mL 立式螺口样品管包装，每管 100 μL。置于-80 ℃ 冰箱中冷冻保存。应在干冰或冰袋环境中运输，运输时样品温度不超过 25 ℃。

    2.使用注意事项：使用前应提前从冰箱内取出，待完全溶解后震荡混匀，瞬时离心后使用。样 品开封后，应尽快恢复至密封状态。建议反复冻融次数不超过 6 次，使用完毕尽快冻存。

六、 合作者

    本标准物质联合研制（生产）单位为ZG农业科学院哈尔滨兽医研究所。 合作定值单位包括：

    北京市理化分析测试中心、ZG农业科学院生物技术研究所、南京市计量监督检测院、上海生 物芯片有限公司、北京泛生子基因科技有限公司、ZG疾病预防控制中心病毒病研究所、北京市肝病研究所 

七、序列信息

    克隆至质粒载体的 PRRSV 基因片段的序列信息如下：

AAGGTGCTTT     TGGCGTTTTC     CATTACCTAC      ACGCCAGTGA     TGATATATGC    TCTAAAGGTA    AGTCGCGGCC    GACTGCTAGG     GCTTCTGCAC    CTTTTGATCT  TTCTGAATTG      TGCTTTTACC     TTCGGGTACA     TGACATTCGT    GCACTTTGAG  AGCACAAATA    GGGTCGCGCT   CACTATGGGA    GCAGTAGTTG     CACTTCTTTG  GGGAGTGTAC   TCAGCCATAG    AAACCTGGAA     ATTCATCACC    TCCAGATGCC  GTTTGTGCTT     GCTAGGCCGC    AAGTACATTC     TGGCCCCTGC    CCACCACGTC  GAAAGTGCCG    CGGGCTTTCA    TCCGATTGCG     GCAAATGATA   ACCACGCATT  TGTCGTCCGG     CGTCCCGGCT     CCACTACGGT     CAACGGCACA    TTGGTGCCCG GGTTGAAAAG    CCTCGTGTTG     GGTGGCAGAA     AAGCTGTTAA    GCAGGGAGTG   GTAAACCTTG    TTAAATATGC    CAAATAACAA     CGGCAAGCAG   CAAAAGAAAA AGAAGGGGAA   TGGCCAGCCA    GTCAATCAGC     TGTGCCAAAT  GCTGGGTAAG  ATCATCGCCC     AACAAAACCA   GTCCAGAGGC     AAGGGACCGG   GGAAGAAAAA  TAGGAAGAAA     AACCCGGAGA    AGCCCCATTT    CCCTCTAGCG    ACTGAAGATG  ACGTCAGGCA     TCACTTTACC   CCTAGTGAGC   GGCAATTGTG     TCTGTCGTCG    ATCCAGACTG    CCTTCAATCA   GGGCGCTGGA   ACTTGTGCCC    TGTCAGATTC AGGGAGGATA    AGTTACACTG    TGGAGTTTAG    TTTGCCGACG    CAACATACTG    TGCGTCTGAT    CCGCGCCACA   GCATCACCCT   CAGCATGATG    GGCTGGCATT   CTTTGGCACC     TCAGTGTTAG     AATTGGGAGA    ATGTGTGGTG    AATGGCACTG   ATTGACACTG    TGCCTCTAAG     TCACCTATTC       AATTAGGGCG     ACCGTGTGGG  GGTAAAGTTT     AATTGGCGAG       AACCATGCG

声明

1．本标准物质仅供实验室研究与分析测试工作使用。因用户使用或储存不当所引起的投诉，不予承担责任。

2．收到后请立即核对品种、数量和包装，相关赔偿只限于标准物质本身，不涉及其他任何损失。

3．仅对加盖“ZG计量科学研究院标准物质专用章”的完整证书负责。请妥善保管此证书。

4．如需获得更多与应用有关的信息，请与技术咨询部门联系。