资源编号:BNCC337879
英文名: EA.hy926
类型: 贴壁生长
形态: CM1-1培养液中,贴壁,上皮细胞样,梭形,中间凸起,两端细长
分离基物: 在PEG胁迫下,将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合,构建了人脐静脉细胞株,EA.hy926
提供形式: 复苏形式:T25培养瓶1瓶;或者冻存形式:2ml冻存管2支,干冰费另计。
安全等级: 1
应用领域: 融合子在HAT培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。EA.hy926已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器,分化的内皮细胞特性如血管生成,体内平衡/血栓形成,血压及炎症反应。
培养方法
| 传代方法 | 将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入2mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,则吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移至培养箱消化,约1min取出。传代用6mL CM1-1培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可分3~6皿培养; |
| 生长条件 | 37℃,5%CO2,CM1-1培养液。CM1-1培养液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培养液,含谷氨酰胺,含丙酮酸钠。 |
| 存储条件 | 冻存则用6mL冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为6支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存,过夜转移至液氮中保存。 |
EA.hy926 人脐静脉细胞融合细胞
贴壁,上皮细胞样
编号: 337879
产品形式: 2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ;
安全等级: 一级,安全柜或超净台操作
培养:37℃,5%CO2 CM1-1 培养液
收货须知:收货当天发现异常,请在 24 小时内及时联系客服,逾期视为收货良好;冻存管形式,收货后及时置于-80℃冰箱保存,若 长时间不使用,应过夜转移至液氮保藏;T25 形式,收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h,然后再对细胞进行常规操作。复苏时每 管一次用完不得留存,复苏后传一代,即可正常使用。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务。
培养条件:37℃,5%CO2,CM1-1 培养液。CM1-1 培养液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM 高糖培养液,含谷氨酰胺,含丙酮酸钠。
复苏步骤:
①新制 100mm 平皿 1 个,含 12mL 上述培养液;
②冻存管从液氮或-80℃中取出,37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入 安全柜复苏;
③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中,顺时针摇匀;
④放入(37℃,5%CO2)培养箱中,过夜换液,3-5 天长满。
传代/冻存:将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 2mL(/100mm 皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落 时,则吸除大部分胰酶,留约 0.5mL,移至培养箱消化,约 1min 取出。
①传代:用 6mL CM1-1 培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可 分 3~6 皿培养;
②冻存:用 3mL 冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为 3 支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存。
复苏质量记录:根据复苏要求,对以上细胞株进行复苏,记录结果如下:
| 项目 | 质量标准 | 复苏记录 |
| 复活性 | 18h 贴壁,95h 长满 80% | 过夜 18h 后观察贴壁,72h 密度达 80% |
| 细胞形态 | 贴壁,上皮细胞样 | CM1-1 培养液中,贴壁,上皮细胞样,不规则形,中间凸起,两端细长 |
| 附图 | ![]() | ![]() |
| 结论 | 复活性好,且细胞形态无异常,合格 | |
质检员/日期: 李璐 2020.04.29 审核员签字:苏丹
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