永生化人脑微血管内皮细胞

培养方法

hCMEC/D3 永生化人脑微血管内皮细胞

贴壁，上皮细胞样

编号： 337728

培养：37℃，5%CO₂ ECM 培养液

产品形式： 2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶

安全等级： 一级，安全柜或超净台操作

收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；T25 形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h，然后再对细胞进行常规操作。复苏时每管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。

培养条件：37℃，5%CO₂，ECM 内皮细胞专用培养基。ECM 培养液：500mlECM+25mlFBS+5mlECGS+5mlP/S

复苏步骤：

①新制 100mm 平皿 1 个，含 12mL 上述培养液；

②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入 安全柜复苏；

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；

④放入（37℃，5%CO₂）培养箱中，过夜换液，5-7 天长满。

传代/冻存：将旧培养液吸除，PBS 清洗两遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察， 期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约 0.5mL，移至培养箱消化，约 0.5min 取出。传代用 6mL 10%的 FBS 完 全培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分 3~6 皿培养；冻存则用 3mL 冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为 3 支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。

复苏质量记录：根据复苏要求，对以上细胞株进行复苏，记录结果如下：

项目	质量标准	复苏记录
复活性	18h 贴壁，168h 长满 80%	过夜 18h 后观察贴壁，108h 密度达 80%
细胞形态	贴壁，上皮细胞样	ECM 培养液中，贴壁，上皮细胞样，多角形、梭形
附图
结论：	复活性好，且细胞形态无异常，合格

质检员/日期： 丁保敏 2020.07.14            审核员签字：朱玥

关于此细胞株更多信息可在 BNCC 官网查询：www.bncc.org.cn.或发电子邮件至技术指导邮 箱咨询 tech@bncc.org.cn。