人皮肤黑色素瘤细胞

培养方法

SK-MEL-1 人皮肤黑色素瘤细胞

半贴壁半悬浮，上皮细胞样

编号： 342058

培养：37℃，5%CO₂ CM2-1

培养液产品形式： 2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶

安全等级： 一级，安全柜或超净台操作

收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若 长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；T25 形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h，然后再对细胞进行常规操作。复苏时每 管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。

培养条件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培养液。CM2-1 培养液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培养基，含谷氨酰胺。

复苏步骤：

①新制 100mm 平皿 1 个，含 12mL 上述培养液；

②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入 安全柜复苏；

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；④放入（37℃，5%CO₂）培养箱中，过夜换液，7-10 天长满。

传代/冻存：将培养液（含悬浮细胞）吸至离心管中，(110g，3min)离心，收集细胞；皿中细胞用 PBS 清洗两遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约 0.5mL，移至培养箱消化，约 1min 取出。①传代：将以上皿细胞用 4mL CM2-1 培养液终止消化，离心管细胞用 2mLCM2-1 培养液重悬， 共计 6mL 培养液一并吸至皿里混匀，分 3~6 皿培养；②冻存：用 3mL 冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，后吸出与离心管细胞混匀， 分为 3 支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。

复苏质量记录：根据复苏要求，对以上细胞株进行复苏，记录结果如下：

项目	质量标准	复苏记录
复活性：	18h 贴壁，244 长满 80%	过夜 18h 后观察贴壁，240h 密度达 80%
细胞形态：	半贴壁半悬浮，上皮细胞样	CM2-1 培养液中，半贴壁半悬浮，上皮细胞样，长梭形，圆形
附图：
结论：	复活性好，且细胞形态无异常，合格

质检员/日期： 何立胜 2020.09.24 审核员签字：丁保敏

关于此细胞株更多信息可在 BNCC 官网查询：www.bncc.org.cn.或发电子邮件至技术指导邮 箱咨询 tech@bncc.org.cn。