Ni-TED 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱，5 mL

产品简介   

Ni-TED Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联三（羧甲基）乙二胺（TED）为配体，螯合镍离子（Ni²⁺）而制备成的一种介质。Ni-TED Agarose Resin 6FF与Ni²⁺具有5个螯合位点，使得其对于 Ni²⁺具有很强的约束力，这一特性赋予了本品具有优异的 DTT以及 EDTA 耐受性，特别适用于纯化真核细胞培养上清液中的His标签蛋白。本品用于带有 His 标签的蛋白纯化时拥有稳定性高、复杂环境中一步纯化蛋白、目标蛋白质吸附量大（但会低于Ni-NTA）、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、重复利用率高等优点。

Ni-TED 6FF Chromatography Column是一种以Ni-TED Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，规格5 mL, 该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

产品信息

产品性质

储存条件

2~8℃保存，有效期4年。

使用说明

1. 纯化流程

1. 缓冲液的准备

缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱。Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，pH 7.4

洗杂缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，0-30 mM 咪唑，pH 7.4

洗脱缓冲液：20 mM PBS，0.5 M NaCl，50-500 mM 咪唑，pH 7.4

2. 样品准备

在上样前将宿主细胞碎片通过离心等方式去除，7000 rpm离心15 min，收集上清。然后过 0.45 um 的微孔滤膜。为了获得最大的载量，不要在样品蛋白溶液中添加咪唑。

3. 样品纯化（以AKTA使用为例）

a）将泵管道注满去离子水。将预装柱顶端堵头卸掉，连接到层析设备入口，然后将底端堵头打开，连接到层析设备。

b）3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。

c）至少5倍柱体积的平衡缓冲液平衡色谱柱。推荐流速为1-5 mL/min。

d）利用泵或注射器上样。【注】若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

e）洗杂缓冲液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

  【注】在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。

f）洗脱缓冲液一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。

g）随后依次用2倍柱体积的1 mol/L NaOH和5倍柱体积的去离子水清洗填料。5倍柱体积的20%乙醇平衡填料，最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

2. 在位清洗

当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5 Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1. 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类

使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20 min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1 M醋酸溶液，接触时间为1-2 h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。

2) 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

清洗好的柱子可再用20%乙醇冲洗2个柱体积，最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240606