JC-10线粒体膜电位荧光探针

产品描述

线粒体膜电位荧光探针JC-10是JC-1的升级产品，同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用，但是其水溶性很差，即使在1 μM浓度的条件下，JC-1也会在水的缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性，可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。

正常细胞内，JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到，绿色荧光可用FL1通道分析，红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术，也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台。

在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过，JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。

产品性质

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。储存液分装成单次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，约一年有效。

注意事项

1）JC-10是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

2）JC-10染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

工作液配制：

1）JC-10粉末（5 mg）：直接加2.5 mLDMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到2 mg/mL（约3 mM）的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。

2）JC-10储存液（1 mg in DMSO）：本品是JC-10的DMSO储存液，浓度为2 mg/mL（约3 mM）。使用者需要根据单次用量来分装，-20℃避光干燥，避免反复冻融。

3）工作液配制（现配现用）：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他缓冲液（pH 7-8，含0.02% Pluronic® F-127）配制成10-30 µM 1×工作液。涡旋混匀。

注：对于某些细胞，在pH 8情况下可能会阻止JC-10渗透入细胞。

JC-10染色步骤（荧光酶标仪）

1）细胞准备

贴壁细胞： 细胞养过夜使其密度达到2×104~8×104 cells/well/90 μL（96孔板）或者5×103~2×104cells/well/20μL (384孔板)。

悬浮细胞：离心后重新将细胞悬浮在培养液中1×105~2×105 cells/well/90 μL（多聚赖氨酸包被的96孔板）或者 2.5×103~5×104 cells/well/20 μL(多聚赖氨酸包被的384孔板)。实验前800 rpm离心2分钟。注意：不同的细胞系需要根据具体情况优化凋亡实验用的最佳细胞密度。

2）用实验药物（10 µL 10×化合物）处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。空白对照（只有培养基不含细胞）中加入相同量的药物。 

注：药物处理前没有必要清洗细胞。但是，如果药物对血清敏感，可在加入药物前吸掉培养基和血清因子。然后加入等量体积的HBSS溶液到孔内。或者细胞直接培养在无血清培养基内。

3）加入100 µL/孔（96孔板）或25 µL孔（384孔板）JC-10工作液。

4）37℃，5% CO2孵育15-60 min。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次实验建议优化体系。
5）直接进行荧光变化检测，记录Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光

值，然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。

（可选）或者，吸除JC-10工作液，加入100 µL/孔（96孔板）或25 µL/孔（384孔板）HHBS，再进行后续的荧光酶标仪检测。

JC-10染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）

1）培养细胞过夜使其在药物处理以诱导凋亡时的密度为：5×105~1×106 cells/mL。选择实验药物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。

注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

2）离心，去上清，每管得到1-5×105细胞。

3）用500 µL JC-10工作液重悬细胞。

4）室温孵育或37 ℃，5%CO2孵育15-60 min，需避光。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。

5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

（可选）或者，吸除JC-10工作液，加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL/孔（384孔板）HHBS，再进行后续的荧光显微镜检测。
 

HB170419