人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（只提供复苏）

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（只提供复苏）介绍：

产品中文名称：人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（只提供复苏）
产品英文名称：NK-92MI
参考用途：/
形态特性：淋巴母细胞样，圆形，多数聚团
培养基：NK-92MI细胞专用培养基：MEMα＋0.2mM Inositol＋0.1mM β-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋12.5% HS＋12.5% FBS＋1% P/S
培养条件：37℃；5%CO2+95%空气；
培养方法：复苏步骤：①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心3-5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞。③然后将细胞悬液加入到含有6-7mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。培养瓶建议竖着培养。
细胞传代：①离心法：收集细胞，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含8mL培养基的T25瓶中。②半量换液法：可选择半量换液方式；请将上清培养基轻轻吸走一半，将剩余留有细胞沉淀的培养基重悬混匀，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含8mL培养基的T25瓶中。③注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到大于2×106个/mL时，重复传代操作或者冻存。
存储形式：液氮
提供形式：冻存管；T25培养瓶
备注：支原体阴性。有STR报告。NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。 NK-92MI是转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株。 亲本细胞通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2 cDNA进行转化。 可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。 这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株CRL-2407(NK92)及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株CRL-2409(NK-92CI)都可从ATCC得到。NK-92MI 和 NK-92CI这两个变种都包含、表达并合成hIL-2 cDNA。 NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。 1998年九月提交到ATCC的培养物污染了支原体。 其后代通过BM 细胞周期蛋白处理21天消除支原体。 处理后六周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测。 结果都呈阴性。 1. NK-92和NK-92MI细胞均为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数分散的细胞，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片； 2. NK-92和NK-92MI细胞对营养需求很高，建议使用进口胎牛血清和马血清培养，白介2的质量对NK-92的生长影响很大，正常培养时换液周期为2天，建议使用半量换液和离心换液交替进行，即半量换液1-2次后离心全量换液一次，尽量减少离心次数； 3. 细胞生长时聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团显微镜下为白色透亮的，若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时可在换液后将细胞团轻轻摇散，或者用移液器轻轻吹散，吹打力度不可过大，否则会出现大量死细胞和细胞碎片。这个细胞没有聚团的活性很低。细胞对营养要求也很高，千万不能团块太大营养不足，不然48小时细胞就会死亡。这个细胞计数是不准确的 因为细胞成团长，团块不可能吹散计数，还有就是散落的细胞细胞活性不好，所以细胞检测活性也是不准确的。 4. 运输条件可能会对细胞造成一定的影响，收到细胞后请按以下方法处理： a) 收到细胞后静置，显微镜下观察细胞并拍照，主要找聚集的细胞团； b) 将培养瓶竖置，静置4~6h，肉眼观察大部分细胞团都沉到底部后，将多余的培养基轻轻倒入50ml离心管中离心收集一部分细胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右时可换用移液器吸取上清，保证大部分细胞团留在瓶中），补加3~4ml新鲜培养基进行培养，若细胞量较多可分两瓶，离心收集的细胞也可单独接种培养； c) 细胞对机械损伤特别敏感，所以最好是不要离心 5. 细胞复苏时不能离心处理，提前准备一个离心管，加10ml培养基，把溶解后的冻存细胞接入，静置2小时左右，细胞都沉降在底部，去上清，用完全培养基接到T25培养瓶内进行培养