2,2,3,3-四氟-3-甲氧基丙酸|2,2,3,3-Tetrafluoro-3-methoxypropanoic acid
豆甾醇|Stigmasterol
庚酸睾酮|Testosterone 17-enanthate
甲基硫环磷|Phosfolan-methyl
全氟-4-甲氧基丁酸 (PFMOBA)|Perfluoro-4-methoxybutanoic acid (PFMOBA)
GB 5009.111-2016食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定应用
来源与性质:呕吐毒素，又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇，化学名为3α, 7α, 15-三羟基-12,13-环氧单端孢霉-9-蒽-8-酮，属单端孢霉烯族化合物，由于它可以引起猪的呕吐而得名。呕吐毒素主体成分为DON（deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇），属于单端孢霉烯族化合物，主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。另外，头孢菌属、漆班菌属、木霉属等的菌株都可产生该毒素。单端孢霉烯族毒素共有150多种，是一类强有力免疫抑制剂，所引起典型症状是采食量降低，所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素（DON）是其中最重要一种毒素，主要来自镰刀菌属（Fusarium），尤其是禾谷镰刀菌（Fusariumgraminearum）和黄色镰刀菌（Fusarium culmorum）。
法律与法规：呕吐毒素是食品中常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在，通常在欧洲及北美发现的3种毒素是脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-脱氧雪腐镰刀菌烯醇。由于它们具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质，因此，对人类及动物的健康构成了威胁，特别是对免疫功能具有明显的影响。根据DON的剂量和暴露时间不同可引起免疫抑制或免疫刺激。当人摄入了被DON污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。由于中国传统饮食习惯中粮谷比例大大高于西方，使得呕吐毒素的危害更为突出。1998年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为3类致癌物。欧盟要求呕吐毒素要小于1.0mg/kg；中国饲料要求低于1ppm。
《GB 5009.111-2023食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》第二法免疫亲和层析净化高效液相色谱法，试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水提取，经免疫亲和柱净化后，用高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。
曼哈格参考《GB 5009.111-2023食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》第二法，重现了国标食品中呕吐毒素的检测方法，采用小麦粉中呕吐毒素质控样BQC1010147223，乙腈中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（BePure-21712XA-1.2mL）标准溶液，脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱净化样品，C18色谱柱分离，高效液相色谱仪紫外检测器检测，外标法定量。
一、标准物质
单标：乙腈中脱氧雪腐镰刀菌烯醇，100μg/mL
货号：BePure-21712XA-1.2mL
二、前处理
萃取柱:脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱，
货号：66011
质控样品：小麦粉中呕吐毒素
货号：BQC1010147223
1标准溶液配制
标准储备溶液(100μg/mL)：BePure-21712XA-1.2mL，乙腈中脱氧雪腐镰刀菌烯醇，100μg/mL。
混合标准工作溶液(10μg/mL):准确吸取 100μg/mL DON标准储备液1.0 mL于同一10 mL容量瓶中 ,加乙腈定容至刻度。
标准系列工作溶液:准确移取适量脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液用初始流动相稀释,配制成100 ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL、5000ng/mL 的标准系列工作液，4℃保存，有效期7d。
2提取
称取5g试样(准确至0.1g)于50 mL离心管中，加入1g聚乙二醇，加水20mL，涡旋混匀，置于超声波中超声20min，以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清（或在6000 r/min下离心10 min.）。收集滤液于干净的容器中。10000r/min离心5min。
3净化
免疫亲和柱净化：
事先将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。待免疫亲和柱内原有液体流尽后，将上述样液移至玻璃注射器中，准确移取上述滤液2mL，注入玻璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节下滴速度，控制样液以每秒1滴的速度通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱中。用5mLPBS缓冲盐溶液和5mL水先后淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1滴-2滴，直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。
洗脱：
准确加入2mL甲醇洗脱亲和柱，控制每秒1滴的下滴速度，收集全部洗脱液至试管中。在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，加人1.0 mL初始流动相，涡旋30 s溶解残留物，0.45 μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。
三、仪器检测方法：
液相色谱柱：C18柱（250mm 4.6mm 5μm)
流动相：甲醇+水（20+80）
流速：1mL/min
柱温：35℃
进样量：20μL
检测波长：218nm
四、检测结果
营业执照已审核
分享
收藏
沪公网安备 31011502008050号