酶离者 视网膜组织单细胞解离酶 MJ019 温和解离 多元复合酶

优势特点：

1、一步即用型

本产品只需把配套的酶干粉溶解在溶解液里，一步操作即可进行后续实验。无需像进口竞品一样，把三四种酶分别溶解在不同溶液里，再分别进行体积计算，后量取不同体积的酶混合在一起并混匀才能使用，本产品无需任何称量、计算，避免多步骤操作和复杂的计算，减少出错概率。

2、多元复合酶

本产品是自主研发生产的多元复合酶，根据不同组织的细胞间质种类配备8种以上的复合酶，可以更好的消化解离细胞间的各种组织基质，比单纯使用进口胶原酶IV、DNA酶或进口竞品的三四种混合酶的解离效率更高，解离时间短、细胞得率高、细胞活性强、抗原表位完整，自研自产成本更低，更有竞争力。

3、解离时间短

由于本产品使用的是8种以上自研自产的特异性组织解离酶，大多数qi官组织在10-15分钟即可解离完全，解离时间超短，而单纯使用进口胶原酶IV、DNA酶或进口竞品的三四种混合酶需要1小时左右，甚至需要2-3小时才能解离完全。

4、细胞得率高

建立在多元复合酶的基础上，该产品可以更好的消化细胞间的各种组织基质，组织消化更彻底，组织单细胞完全释放出来，组织团块残留少，因此细胞得率更高。

5、细胞活性强

针对不同的组织该产品配套了不同的特异性解离复合酶，该复合酶是温和的解离方式，不像胰酶一样对细胞有较大损伤，并且该复合酶酶解消化时间更短，大幅减少了细胞的离体时间，防止了解离酶的过度消化，因此能得到更高活率的单细胞。抗原表位更完整的细胞。

6、抗原表位完整

由于该产品酶解效率更高，酶解时间和细胞离体时间更短，组织细胞损伤更低，细胞结构完整性更好，细胞活性更强，因此抗原表位更完整，更有利于抗ti结合染色，解离的单细胞更适合进行流式分析分选实验。

使用方法

1、溶解酶干粉

初次启用试剂盒时执行该操作步骤。将A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液qiang取B瓶中的溶解液反复吹打A瓶中的酶干粉并转移至B瓶中，必要时可将qiang头口用剪刀剪大，确保A瓶中酶干粉全部转移至B瓶中；随后盖紧B瓶瓶盖上下颠倒B瓶直至酶干粉完全溶解，必要时可放置摇床上摇晃至完全溶解，完全溶解的酶溶液呈现清澈微棕色。

2、过滤分装解离酶

在A瓶中酶干粉完全溶解在B瓶溶解液后，根据后续实验如需要无菌解离组织，则需用注射器和0.22μm无菌过滤器过滤除jun后分装。建议每5mL分装一瓶，分装至A瓶中，分装后应立即冻存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6个月。单次未使用完可冻存后下次继续使用，但反复冻融不要超过三次，每冻融一次酶活会降低一部分，酶活降低时可增加酶的使用量以增强酶解效果。

3、酶解实验操作

(1)实验准备：预制碎冰，冰上解冻单细胞解离酶和酶解终止液，单细胞解离仪器开机预热，PBS预冷，眼科剪、镊子等无菌手术器械，40 μm无菌细胞筛，离心管、离心机等预冷。

(2)组织收集：无菌条件下收集组织，立即置于冷的PBS中，尽可能4h内处理，如需放置更长时间，请使用高活性组织保存液（货号MJ104）。

(3)清洗组织：将组织用冷PBS洗1-2次以去除血液、坏死组织等杂质，称重记录。

(4)剪碎组织：将清洗过的组织转移至解离管中，用锋利眼科剪碎成1-2 mm³小块，剪至泥糊状，剪得越碎酶解就越充分，单细胞酶解时间就会越短；如有配备组织单细胞解离仪，觉得剪碎较麻烦也可不用严格剪碎，同样能获得较好的解离效果。

(5)酶解组织：组织剪碎后，取适量单细胞解离酶加入解离管中，上下颠倒解离管使解离酶与组织充分混匀。

①如配备有组织单细胞解离仪，可按照仪器操作规范进行单细胞解离。本产品适用市面上所有进口或国产品牌的组织单细胞解离仪，但需注意本产品解离效率比自备酶或其他竞品的酶都高，解离时间可减少至少一半，需每隔5-10min确认一下解离情况，不同组织解离完全的时间从5min到50min不等，在保证解离效果情况下尽可能减少酶解时间，酶解完全即可终止酶解；

②如未配备组织单细胞解离仪，也可进行手动解离。在剪碎组织步骤中需严格按照要求剪碎组织；根据组织和所加酶体积选择在1.5mL EP管或5mL EP管中，将解离酶与组织充分混匀，用剪刀将1mL移液qiangqiang头口稍微剪大后，用移液qiang用力吹打混合物，如吹打堵塞qiang头说明组织剪碎不够彻底，可继续剪碎组织或将qiang头再剪大一些，保证能用移液qiang反复吹打混合物，反复吹打十余次后立即放入37℃培养箱、水浴或金属浴中孵育，有摇床效果更佳，每孵育5分钟需进行一次反复吹打，直至组织团块完全解离成单细胞悬液。

(6)单细胞过滤：待组织完全解离后，立即瞬离解离管3s，并将解离管插在冰上，用移液qiang吸取上清通过40 μm的滤网进行过滤，过滤全程在冰上操作。

(7)终止酶解：取等量的酶解终止液（货号MJ102）或完全培养基进行终止酶解。

(8)收集细胞：4℃、400g离心5分钟后弃上清，用预冷的PBS清洗后再离心弃上清。

(9)红细胞裂解：取适量红细胞裂解液（货号MJ103）重悬细胞沉淀，冰上孵育10分钟，间歇吹打轻摇，4℃、300g离心5分钟后弃上清。

(10)清洗：取预冷的PBS重悬，4℃、300g离心5分钟后弃上清，重复清洗2次

(11)去除碎片：如碎片较多，可用高效碎片去除剂（货号MJ101）去除碎片。

(12)细胞活性检测：台盼蓝或AOPI染色，活细胞率应＞85%。

(13)细胞冻存：如单细胞解离后暂时无法进行后续实验，可使用高效高活细胞冻存液（货号MJ105）将单细胞重悬后直接冻存于-80℃，可冻存数年。

实验注意事项：

本产品单供科研使用；如下游实验需无菌培养，全程需在超净台内进行无菌操作，避免污染；酶解需在37℃，其他操作均在冰上操作，严格控制温度；根据组织酶解量调整酶解时间，勤观察及时确认裂解阶段，在保证裂解效果情况下尽可能减少酶解时间，以免时间过长造成对细胞的损伤；若用于单细胞测序等要求较高的单细胞制备，全程需加快速度，单细胞解离后需立即进入下游建库步骤；该酶溶解后-20℃或-80℃保存，可保存6个月，单次未使用完可冻存后下次继续使用，但反复冻融不要超过三次，每冻融一次酶活会降低一部分，酶活降低时可增加酶的使用量以增强酶解效果。