支原体LAMP检测试剂盒（一步法）

产品名称	支原体LAMP检测试剂盒（一步法）
货号	SNCD-004
规格	50次
简介	支原体（Mycoplasma）别名霉形体，直径0.1-0.3um，具有高度多样性，是一种没有细胞壁、可以用人工培养基培养增殖的最小的原核生物。其广泛存在于人和动物体内，大多数不致病。由于其广泛存在，外加体积较小可以通过滤膜混入细胞培养体系，也很难通过普通光镜观察到，普通抗生素对其也没有有效的抑制作用，因此成为细胞培养中比较常见而且难以检测清除的污染。 支原体污染对细胞会有多方面的影响，包括以下方面：1.细胞生长速度改变；2.细胞形态、状态改变；3.细胞染色体异常、突变甚至功能改变；4.细胞对环境冲击耐受力降低；5.相关细胞实验获得的数据异常等。可以说对细胞及细胞相关实验有极其严重的影响，因此检测及清除广泛存在的支原体污染成为诸多实验室必须要经历的过程。 支原体污染无法通过肉眼或者普通光镜直接判断，只能通过各种试剂、仪器检测。支原体常规检测方法有：荧光法、培养法、电镜法、常规PCR法、一步PCR法、化学发光法等，不同检测方法能够检测的支原体种类不同，其检测灵敏度、特异性、便捷性也有各自的特点。 本公司生产的一步法支原体检测试剂盒采用LAMP原理，通过支原体特异性引物在恒温条件下对样本进行检测，最终比较反应后样本颜色变化确定样品中是否含有支原体污染。该试剂盒可以有效、快速、灵敏的检测支原体污染，只需要少量样品即可检测支原体污染情况。
使用方法	1.客户需要自备的试剂、仪器 <1>待检测样品：细胞上清、血清或者培养基。 细胞上清建议使用培养细胞3-5天的上清，培养时间过短的上清支原体含量较低可能无法有效检出，血清或者培养基也应在培养箱静置培养1-2天使支原体有一定程度增殖再用于检测。 <2>必备仪器、试剂 a.PCR相关：无菌PCR管； b.通用：恒温水浴锅或PCR仪、水浴锅漂浮板、移液器、无菌Tip头、离心管、双蒸水等； 2.实验步骤 a.水浴锅在实验前调整为60℃（如果使用PCR仪则无需提前调整）； b.所有试剂复温融化后，计算所需检测数量，准备相应数量无菌PCR管，所需检测管数=样本数量+一个阳性对照+一个阴性对照的检测体系； c.每个检测管分别加入24ul LAMP-Myco Buffer+1ul LAMP-Myco Enzyme； d.在管中分别加入1ul待测样本，阳性对照管加入1ul阳性对照，阴性对照管中加入1ul双蒸水； e.水浴锅中反应时需要在每管中加25ul石蜡油以防止水浴过程中反应体系的水分蒸发导致实验结果不准，若使用PCR仪反应则仅需盖紧管盖、无需添加石蜡油；60摄氏度恒温水浴或PCR仪恒温保持60min； f.反应结束后将各管颜色分别与阴阳性管对比，根据实际管内颜色确定支原体污染情况； g.结果判定： 反应产物颜色为紫色，支原体判定阴性；反应产物颜色变为蓝色，判定为支原体污染；少数情况下，反应液颜色可能介于紫色与蓝色之间，此时可以延长反应时间至75-90min，若颜色变成蓝色，判定为阳性，未变蓝色判定阴性；
产品组分
存储条件	-20℃（避免反复冻融）
保质期	一年（避免反复冻融）

注意事项：
1.该产品-20℃可以保存一年以上，但反复冻融或保存不当可能会导致反应酶或阳性对照失效，如需多次使用，建议小量分装，分装时避免外源污染。
2.使用前应将各试剂、样品复温至20-25℃再使用，否则可能会影响实验效果。
3.操作时戴好手套，避免外源污染。
4.该产品仅供科研使用，不得用于诊断或临床实验。