| 一、Lec1 [Pro-5WgaRI3C]细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | Lec1 [Pro-5WgaRI3C](仓鼠卵巢细胞) |
| 细胞别称 | CHO-Lec1；CHOLec1；Pro-Lec1.3C；Pro-5Lec1.3c；Pro-5WgaRI3C |
| 细胞货号 | SNL-352 |
| 来源 | 卵巢；雌性；成年 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样(梭形或多角形) |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | Lec1细胞是通过筛选小麦胚芽凝集素抗性而从亲本CHO细胞亚系Pro-5（脯氨酸营养缺陷型，参见CHO Pro-5）衍生的突变克隆。Lec1细胞缺乏GlcNAc糖基转移酶，因此N-连接的碳水化合物在Man5-GlcNAC2-Asn中间体处被阻断。Lec1细胞可用于研究改变的N-连接糖基化对内源性糖蛋白或通过病毒感染或外源DNA转染引入的糖蛋白的功能和区分的影响。Lec1细胞含有频率较低的Pro+回复体（约为100000个细胞中的1个），应适用于需要Pro-标记物的互补研究。Lec1细胞是脯氨酸营养缺陷型细胞，必须在含有脯氨酸（40mg/L）的培养基中生长。Lec1细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。 |
| 二、Lec1 [Pro-5WgaRI3C]细胞培养操作 | |
| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
| 三、Lec1 [Pro-5WgaRI3C]细胞冻存操作 | |
| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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