| 一、CHO/dhFr- [CHO-DXB11]细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | CHO/dhFr- [CHO-DXB11](仓鼠卵巢细胞（二氢叶酸还原酶缺陷）) |
| 细胞别称 | CHODXB11；DXB11-CHO；CHO-DUX-B11；CHO(DuxB11)；CHO-DUK-XB11；DUK-XB11；CHO-DUKXB11；CHO-DUKXB11；DUKX-B11；DUXB11；DUXB11；DXB-11；DXB11；CHO-DUKX；DUKX-CHO；DUKX；CHO-DHFR-；CHO/dhFr-；CHO/dhfr-；CHO(dhfr-)；CHOduk-；CHOB11；B11 |
| 细胞货号 | SNL-286 |
| 来源 | 卵巢；雌性；成年 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样(梭形或多角形) |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 收录 | 武大典藏中心CCTCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | IMDM+10% FBS+HAT+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | CHO/dhFr-细胞为二氢叶酸还原酶缺陷型，在没有外源嘌呤的情况下，细胞生长需要这种酶，因此CHO/dhFr-细胞系对次黄嘌呤（或腺嘌呤）、甘氨酸和胸腺嘧啶有需求，培养基中没有HT（次黄嘌呤-胸腺嘧啶）时，该细胞会死亡（细胞在不添加次黄嘌呤和胸苷的情况下继续生长，可能是因为细胞从培养基中获得了足够量）。CHO/dhFr-细胞培养基中加入氨甲喋呤可以防止对该药物具有低抵抗性的回变细胞的生长，可以保持细胞为二氢叶酸还原酶缺陷型。CHO/dhFr-细胞可作转染宿主。 |
| 二、CHO/dhFr- [CHO-DXB11]细胞培养操作 | |
| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
| 三、CHO/dhFr- [CHO-DXB11]细胞冻存操作 | |
| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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