Ana-1(小鼠巨噬细胞)

一、Ana-1细胞基本属性
细胞名称	Ana-1(小鼠巨噬细胞)
细胞别称	Ana-1；ANA1
细胞货号	SNL-020
来源	巨噬细胞；J2逆转录病毒转染；C57BL/6
细胞形态	巨噬细胞样(圆形或不规则形，悬浮或附着瓶底)
细胞类型
生长特性	半贴壁细胞
收录	KCB
生物安全等级	1
致瘤性
培养条件	1640+10% FBS+1% P/S
培养环境	37℃；5% CO2；饱和湿度
细胞简介	ANA-1细胞是从感染J2重组逆转录病毒用于永生化的C57BL/6（H-2b）小鼠的骨髓细胞中建立的。ANA-1细胞表现出粘附细胞和非粘附细胞的二型生长模式，形态特征是大量空泡和偏心核。ANA-1细胞FcyR（Ly-17）、Mac-1、Ly-5和热稳定抗原（HSA）以及Ly5.1和Ly6B呈阳性。ANA-1细胞还持续表达溶菌酶，表现出非常高的吞噬活性，并且在LPS治疗时具有肿瘤活性，因此属于骨髓单核细胞谱系。
二、Ana-1细胞培养操作
换液周期	2-3天
培养基体积	T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例	1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法	1.轻轻吸走培养上清，留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞； 2.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 4.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项	半贴壁细胞会附着瓶底，但贴壁不紧，轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响。
三、Ana-1细胞冻存操作
冻存液配方	92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格	200-300万/ml，1ml每管
冻存方法	1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存
注意事项	冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

Tips：1.细胞悬浮或贴壁、圆形或不规则形态生长，偶有小聚团； 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率； 3.悬浮细胞密度维持1E5-5E5/mL之间，密度过低或者过高可能会影响细胞状态； 4.细胞圆形或多角形，贴壁或悬浮生长，传代时均可收集培养，换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶，若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞；

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