9L/lacZ(大鼠胶质肉瘤细胞)

一、9L/lacZ细胞基本属性
细胞名称	9L/lacZ(大鼠胶质肉瘤细胞)
细胞别称	9L/LacZ
细胞货号	SNL-254
来源	恶性胶质瘤；雄性；Fischer 344
细胞形态	成纤维细胞样(梭形或多角形)
细胞类型
生长特性	贴壁细胞
收录	ATCC
生物安全等级	1
致瘤性	Yes, forms tumors in the brains of CD Fischer 344 rats
培养条件	DMEM+10% FBS+1% P/S
培养环境	37℃；5% CO2；饱和湿度
细胞简介	9L/lacZ细胞于1989年从9L细胞系（大鼠亚硝基脲诱导的胶质肉瘤细胞系）发展而来，用携带编码β-gal的大肠杆菌lacZ基因和带有G418抗性的Tn5新霉素基因的BAG复制缺陷逆转录病毒载体感染9L细胞，然后将细胞在G418中培养14天，克隆并评估β-gal的产生获得了9L/lacZ细胞。9L/lacZ产生高水平的酶，并被选择用于研究。9L/lacZ细胞持续表达lacZ报告基因产物，从E. coli衍生来的beta-半乳糖苷酶可以通过与组织切片的组织化学染色一样的方式来鉴定单个肿瘤细胞，同一片子上的淋巴细胞和其它响应细胞可以通过双标记抗体进行鉴定，染色细胞和背景的对比有益于图像分析。9L/lacZ细胞是少数允许量化分析的大脑微观肿瘤模型中的一种，这种肿瘤模仿了人类大脑肿瘤的生长和转移的重要特性。9L/lacZ细胞beta-半乳糖苷酶的表达十分稳定，但细胞培养数月后应该重新进行克隆。
二、9L/lacZ细胞培养操作
换液周期	2-3天
培养基体积	T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例	1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法	1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项	不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、9L/lacZ细胞冻存操作
冻存液配方	92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格	200-300万/ml，1ml每管
冻存方法	1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存
注意事项	冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

Tips：1.细胞贴壁偏弱，消化时间偏短，注意控制消化时间； 2.注意控制细胞密度，过高或者过低都可能影响细胞状态，不要长时间高密度培养； 3.细胞密度过高时及时传代，避免培养基变黄导致细胞脱落或者状态变差； 4.细胞生长较快，注意及时换液及传代；

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