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Capto HIC填料的基架为高交联,高流速琼脂糖,配基与传统的HIC填料相同,主要包括苯基(Phenyl),丁基(Butyl)和辛基(Octyl)。根据填料粒径的不同,可分为Capto(平均粒径75um)和Capto ImpRes(平均粒径40um)两个系列。
Capto HIC填料的特点:
图(1)Capto基架填料优越的物理机械性能。(A)可以使用更高的柱高和层析流速(B)更宽的工艺参数操作窗口,灰色的线为保留时间,单位分钟。
通过测定总有机碳(TOC)的泄露,显示Capto HIC填料可以在pH范围1-14,温度40℃条件下,耐受一个星期(图2),同时填料的疏水性能和配基密度都没有明显的变化。优越的化学耐受性可以保证层析填料使用后的彻底清洗,增加了层析填料的使用寿命。
图(2)
Capto HIC与HIC Sepharose Fast Flow具有近乎相同的选择性和分辨率,而Capto HIC ImpRes与HIC Sepharose High Performance在选择性和分辨率上也几近相当(图3)。
图(3)Capto Phenyl ImpRes与Phenyl Sepharose high performanc(A),Capto Butyl ImpRes与Butyl Sepharose high performance(B)选择性与分辨率的对比。(1)核糖核酸酶A;(2)溶菌酶;(3)α-胰凝乳蛋白酶原
通过测定BSA在穿出10%条件下的动态结合载量(Qb,10),对比Capto HIC ImpRes和HIC Sepharose high performance,两者具有相当的动态结合载量(表1)。
| 疏水层析(HIC)的分离是基于蛋白质的疏水性氨基酸与基质的疏水性配基之间的可逆性相互作用。蛋白质和多肽的疏水氨基酸大多埋藏在蛋白质分子结构的内部。然而,仍然有一些疏水性氨基酸会暴露在蛋白分子的表面与基质的疏水性配基进行相互作用。与反相层析相比,疏水作用层析基质上的配体浓度要低很多,洗脱条件也更加温和,从而有助于保持生物分子的生物活性。HIC特别适合于纯化经过硫酸铵沉淀或高盐洗脱后的样品,高离子强度可以加强蛋白与填料配基之间的疏水相互作用。高离子强度的缓冲液可以增强疏水相互作用,这使得HIC成为硫酸铵沉淀和离子交换层析的一个卓越的纯化步骤。HIC非常适合于纯化工艺中的捕获或中纯步骤。HIC期间,样品成分在高离子强度的缓冲液(典型的是1~2M的硫酸铵或者是3M的NaCl)中结合到填充柱上。高浓度的盐,尤其是硫酸铵,可能会沉淀蛋白质。因此,需要检测将要使用的结合条件下靶蛋白的溶解性。通常采用降低的盐梯度对靶蛋白进行连续梯度或分布梯度洗脱。 | |
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