蛋白质定氮仪

蛋白质定氮仪

1. 仪器安装：

将配件中的硅胶管根据实际需求剪成不同的长度，按照上面左侧示意图连接好（注意接紧，防止漏水）。蒸馏水进口和碱液进口的硅胶管另一端必须浸泡在所对应的液面以下。蒸馏水出口和冷却水出口的硅胶管另一端放入排水池（桶）。冷却水进口连接自来水龙头。在仪器正面左侧托盘上安放空的消化管，右侧放锥形瓶，插入带橡皮塞的玻璃嘴。

2. 仪器检测：

⑴．打开冷却水（水龙头开关），注意流量，控制在3-4L/分钟。接上电源线，打开电源总开关。仪器开始自动加水，从侧面烧杯水位观测口可以看见烧杯内的水位上升，一段时间后会自动停止加水（由系统内水位探针自动控制，水位不足会持续加水）。

⑵．打开加碱按钮，加碱量大概在30mL左右时，关闭加碱按钮.接着打开蒸馏按钮，仪器开始蒸馏。仪器工作10分钟左右（锥形瓶内液体在100-150mL左右），关闭蒸馏按钮（灯熄灭），仪器停止蒸馏，整机检测完成。

3. 实验蒸馏：

在消化管托盘上换上已消化完成并冷却稀释后(一般加20ml蒸馏水稀释)的样品，右侧换成准备好的锥形瓶（锥形瓶内加入50ml硼酸和4-5滴混合指示剂，具体硼酸量由各自实验情况确定），调整氨气回流玻璃嘴和瓶塞，使玻璃嘴浸泡在硼酸液面以下。

然后先打开加碱按钮，加到自己所需要的碱的用量后（确保液体颜色变黑为止），关闭加碱按钮。然后再打开蒸馏按钮。

蒸馏即将完成时（一般蒸馏时间8-12分钟左右，锥形瓶内液体在150-200ml左右），提起橡皮塞，移开锥形瓶，使氨气回流玻璃嘴离开液面，用蒸馏水冲洗玻璃嘴外壁，继续蒸馏10秒钟后，关闭蒸馏按钮，取下锥形瓶待滴定用。

注意：更换样品蒸馏时不需要关闭电源总开关。

4．滴定/计算（以下数据仅供参考，以本行业标准为主）

用0.05mol/LHCL滴定接收瓶内的溶液，滴定至（暗）灰色时为止，记下消耗HCL的毫升数，按下列式子计算蛋白含量：

蛋白质%＝

式中： V₁—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

V₂—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度；

0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；

m—样品的质量（体积），g（ml）；

F—蛋白质系数，按16%计算乘以6.25即为蛋白质。

(空白测定：用0.1克糖代替样品或不加样品作空白测定)

5. 清洗/关机

先换上空的消化管和锥形瓶，把连碱进口的硅胶管换成新的一个硅胶管，另一端放入蒸馏水容器内，然后按蒸馏按钮，用蒸馏水清洗碱泵，一般30秒钟左右后取下碱进硅胶管，排空碱路里面的液体。

然后关闭冷却水（自来水龙头），打开蒸馏水排水开关，排完蒸馏水。ZH关闭总电源开关，拔掉电源线。（ZH一天实验做完后必须进行关机清洗操作）。

蛋白质定氮仪

1. 仪器和工具

a.分析天平：感量0.0001g

b.酸式滴定管：25ml或10ml

c. 锥形瓶:容积250ml

d. 消化管：300ml（消化炉标配中有）

2.试剂

a． NaOH溶液：化学纯，按标注方法配制成40%浓度水溶液（m/v）

b．硼酸（H₃BO₃）：分析纯，按标注方法配制成2%浓度水溶液（m/v）

c. 盐酸（HCL）：分析纯，0.05mol/L标准液，用碳酸钠法标定盐酸

d．混合指示剂：甲基红（G₅H₅N₃O₂）溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二种溶液等体积混合阴凉处保存（保存期三个月）。

3.样品

将消化炉消化完成并且冷却后的样品稀释后进行实验。（消化取样注意：称取0.20g～2.00g固体试样或2.00g～5.00g半固体试样或吸取10.00ml～25.00ml液体试样（约相当氮30mg～40mg），进行消化。）