SpectraMax i3x

一种快速、高通量的病毒中和抗体检测方法

新冠病毒的出现导致了世界范围内的新冠大流行，为了理解病毒的发病机理并开发疫苗，亟需快速开发多种研究工具。检测病毒感染和疫苗接种后的免疫反应对新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗体是免疫反应和疫苗效价的关键生物标志物，患者血清样本中的中和性抗体水平是用于监测有效性的重要参数。 人体血清中和抗体的鉴定常使用传统方法例如蚀斑减少中和试验 (PRNT) 来检测。然而，该方法使用活的、具备感染性的病毒加入到靶细胞中，所以需要生物安全三级实验室以及耗时费力的细胞培养。数据结果的分析耗费时间并且不能自动化。此外，假病毒中和试验 (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二级实验室完成，但此方法需要细胞培养和荧光成像来测得中和抗体活性，因此，也不适用于样品的高通量筛选。

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采用重组 C 因子法在 Molecular Devices 四款不同型号多功能微孔板读板机上进行 定量检测

在制药和YL器械生产过程中，对污染物样品的监测是一个关键步骤。内毒素存在于革兰氏阴性细菌的细胞壁中，是一种常见的污染物，可引起发烧、炎症、头痛、恶心，甚至死亡。内毒素的常规检测方法是鲎试剂溶酶法 (LAL)，核心成分由鲎的血液中提取而来。在内毒素存在的情况下，LAL 通过酶促级联凝固，可以通过比浊法或显色法定量 ( 图 1A )。这些方法涉及多个酶的步骤，并取决于鲎的可用性。 2021 年 2 月 5 日，国家林业和草原局、农业农村部发布公告，调整后的的《 国家ZD保护野生动物名录 》正式发布，将我国分布的鲎科动物 ( ZG鲎、圆尾蝎鲎 ) 升级为国家二级保护动物。ZG药典 2020 年版 9251 细菌内毒素检查法应用指导原则中指出，目前新的细菌内毒素检测方法不断出现，以适应特殊品种细菌内毒素检查的需要，或减少鲎试剂的使用量。如重组 C因子法 ( 见附 )、微量凝胶法等。

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采用 Quant-iT PicoGreen dsDNA 试剂盒对 DNA 进行灵敏的荧光定量

双链 DNA 通常通过测定 DNA 溶液在 260 nm 处的吸光度在酶标仪中进行定量。然而，该方法在典型的光吸收酶标仪上只能测量到约 250 ng/mL。对于涉及小样本的生物应用，如下一代测序和 DNA 扩增产物的定量，需要更敏感的方法。来自Thermo Fisher Scientific 公司的 Quant-iT PicoGreen dsDNA检测试剂盒对 DNA 更特异，比传统光吸收方法的灵敏度高约1000 倍。 如产品手册所述，此实验在微孔板格式中采用单一染料浓度的动态范围从 250 pg/mL 到 1000 ng/mL。在这里，我们证明了使 用 Molecular Devices 公司 SpectraMax®酶标仪和 Quant-iT PicoGreen 实验，用户可以可靠地测量低 至 50 pg/mL 的双链 DNA 浓度。为了ZD化实验的灵敏度，需要使用ZJ的激发和发射波长。

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使用 SpectraMax 微孔板读板机进行 HTRF IP-One Gq 检测

HTRF® 是 Cisbio 公司开发 的用于检 测 生物 分子相互作用的实验技术 1。它将荧光共振能量转移 (FRET) 技术与时间分辨(TR) 荧光技术相结合，可以消除荧光寿命较短的背景荧光。该 检 测方法 使 用铕 (Eu3+) 或 铽 (Lumi4 ™ -Tb) 的穴状 化合 物作为供体，荧光团 ( XL665 或小分子 d2 ) 作为受体。当供体和受体距离足够近时，供体被一个能量源激发，可以引发能量转移到受体，使其在特定波长发出荧光。 在 这 里， 我 们 展 示 了 如 何 使 用 SpectraMax®i3x 和SpectraMax®iD5 多功能微孔 板读 板机 应 用 HTRF 技术进 行Gq- 偶联受体的分析。G 蛋白偶联受体的分析主要通过检测cAMP 和 IP3 这两条信号转导通路调控介导的细胞内钙离子水平的升高。Cisbio 公司的 IP-One Gq 试剂盒通过检测 IP3 的稳定下游代谢产物——磷酸肌醇 (IP1) 的积累，为钙离子检测提供了一种替代方法。

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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法检测 GPCR 活性

HTRF® 是由 Cisbio 开发的用于检测生物分子相互作用的通用技术。它将荧光共振能量转移 (FRET) 技术与荧光的时间分辨(TR) 测量相结合，可以消除短寿命的背景荧光。该测定使用供体和受体荧光团，它们用于标记要研究其结合的蛋白质或其他生物分子。 当两个生物分子相互结合时，供体和受体就靠 在一起了。能量源 ( 例如闪光灯 ) 对供体的激发触发能量转移到受体，受体继而在给定波长发射特定荧光。 HTRF 使 用四种特定的荧光团，它们可以组合形成相容的供体 - 受体 TR-FRET 对。 供体是穴状铕 (Eu3+) 和铽穴状化合物(Lumi4 ™ -Tb)，它们的长寿命荧光使其可用于时间分辨荧光分析。已经开发了两种受体用于 HTRF 分析，XL665 和 d2。两者的激发光谱都与 HTRF 供体的发射光谱重叠，在 665 nm处的发射峰落在供体不显著发射的区域内。Z初的 HTRF 受体 XL665 是一种从红藻中纯化的藻胆蛋白色素。 第二代受体d2 是改良的别藻蓝蛋白，比 XL665 小 100 倍，旨在缓解基于XL665 的检测可能出现的空间位阻问题。

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