5 × Frag/Prime Buffer

产品描述

 

本产品衔接Hieff NGS^® Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina^® (Yeasen: Cat#12251)或者Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI^® (Yeasen: Cat#13332)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cRNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12251或Cat#13332中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free H₂O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。

产品组分
 

运输与保存方法
 

干冰运输，-20°C存放，效期1年。

注意事项
 

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. Input RNA请溶于Nuclease free H₂O，避免Mg²⁺的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为11 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
3. 本产品仅作科研用途！

使用方法
 

当Input RNA是不需要片段化时，请选择方案A；当Input RNA是需要片段化处理时，请选择方案B。

A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12251或Cat#13332试剂按照表1，直接配制第一链cDNA合成反应体系。

表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系

A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。

表2 第一链cDNA合成反应程序

B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

表3 片段化反应体系

B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12251或Cat#13332说明书设置合适的片段化条件。

B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。

表4 第一链cDNA合成反应体系

B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。

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