MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit (2G) 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（瓶装）(2G)

 

MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。

该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留（qPCR法）检测试剂盒配合使用，包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301ES)、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41302ES/41306ES)、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41303ES)和E.coli残留DNA检测试剂盒(Cat#41304ES/41308ES)、SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒(Cat#41310ES)和复制型慢病毒(RCL)检测试剂盒(Cat#41311ES)等。

 

产品组分

类别	组分编号	组分名称	产品编号/规格
			18464ES25 (25T)	18464ES60 (100T)
Part I	18464-A	蛋白酶K（20 mg/mL）	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
Part Ⅱ	18464-B	磁珠悬浮液	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
	18464-C	裂解液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
	18464-D	结合液	10 mL/瓶×1瓶	40 mL/瓶×1瓶
	18464-E	洗涤液A*	8 mL/瓶×1瓶（需加12 mL乙醇）	32 mL/瓶×1瓶（需加48 mL乙醇）
	18464-F	洗涤液B*	4 mL/瓶×1瓶（需加16 mL乙醇）	16 mL/瓶×1瓶（需加64 mL乙醇）
	18464-G	洗脱液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
Part Ⅲ	18464-H	糖原	225 uL/支×1支	900 uL/支×1支
	18464-I	Poly A钾盐	150 uL/支×1支	600 uL/支×1支

 

运输和保存方法

1.Part I组分冰袋运输，4℃可保存1年，长期保存于-20℃。

2.Part II组分室温运输，室温保存，有效期1年。

3.Part Ⅲ组分干冰运输，-20℃保存1年。

4. 收到货后，请检查Part I、Part II和Part Ⅲ共3个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用前请详细阅读使用说明书，严格按照使用说明书操作，样本处理建议在超净台或生物安全柜中进行。

2. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 处理样本及加样时，勤换枪头，避免交叉污染。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

 

实验前准备

1. 自备设备：漩涡振荡器、水浴锅或金属浴、离心机、磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪或其他品牌全自动化核酸提取仪。

2. 自备耗材：10μL-1000μL不等的低吸附带滤芯枪头、1.5 mL低吸附离心管、PCR 8连管或96孔板及相应的管盖或覆膜。

3. 自备试剂：无水乙醇（分析纯）、1×PBS缓冲液（pH 7.4，无Mg²⁺和Ca²⁺）、超纯水。

【注】：推荐您购买本公司的超纯水(Cat#10116ES)。

4. 首次使用时，需在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。

每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

 

一、手工提取操作方法

1. 样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的核酸含量的样本，可用1×PBS（pH 7.4，无Mg²⁺和Ca²⁺）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围内，稀释倍数通常不超过100倍）。

1.2 待测样本为干粉时，可用超纯水将样本稀释至10~100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质时，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec后短暂离心。

【注】：样本蛋白浓度0~100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL；样本蛋白浓度100~200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。

3. 将离心管置于60℃孵育30 min，75℃孵育15min。

【注】：若金属浴升温较快，可在同一个金属浴上孵育；若升温慢，则需提前准备2个金属浴，并将温度分别调至60℃和75℃。

4. 孵育完成后，加入400 μL结合液、9 μL糖原和6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。

5. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋混匀后，放置10 min，每隔2 min涡旋混匀10 sec。

【注】：磁珠使用前需涡旋混匀，保证磁珠彻底重悬。在一次性加样4~5次后，建议再次混匀后再行加样。

6. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1~2 min，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。

7. 加入700 μL洗涤液A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀1 min，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。

8. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1~2 min，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。

9. 加入700 μL洗涤液B（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀1 min，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。

10. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1~2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取弃体。

11. 为保证尽量吸出残留液体，可将离心管快速离心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。

12. 打开管盖，室温或37℃放置5~10 min，直至乙醇完全挥发，磁珠表面无反光至刚出现龟裂即可，不可过度干燥。

13. 将离心管从磁力架上取下，加入100 μL 65℃预热的洗脱液，振荡混匀后短暂离心，65℃孵育5 min，期间振荡混匀1次。

14. 短暂离心后，将离心管放置于磁力架上静置约2 min，待磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至新的离心管中，保存于-20℃，长期保存需放置于-80℃。

 

二、半自动化提取操作方法

配套本公司自动化仪器使用，以32通道核酸提取仪为例。不同品牌和型号的仪器，试剂加入方式可能会有差别，详情请咨询本公司技术人员。

1.样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH 7.4，无Mg²⁺和Ca²⁺）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围内，稀释倍数通常不超过100倍）。

1.2 待测样本为干粉时，可用超纯水将样本稀释至10~100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质时，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec后短暂离心。

【注】：样本蛋白浓度0~100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL；样本蛋白浓度100~200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。

3. 将离心管置于60℃孵育30 min，75℃孵育15 min，得到预处理样本，待用。

4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂：

位置	试剂名称	用量/孔
第1/7列	预处理样本	200 µL
	结合液	400 µL
	糖原	9 µL
	Poly A钾盐	6 µL
第2/8列	洗涤液A*	700 µL
第3/9列	磁珠悬浮液	20 µL
	洗涤液B*	700 µL
第6/12列	洗脱液	100 µL

【注】：

1. 磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀，在一次性加样4~5次后，建议再次混匀后再行加样。
2. 不同品牌和型号的仪器，试剂加入方式可能会有差别，详情请咨询本公司技术人员。

5. 将上述96孔板正确安放置核酸提取仪器中，并放置八联磁棒套。

6. 运行如下程序，程序结束后，将洗脱板转移至新的离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。

32通道核酸提取仪器的提取程序

步骤	孔位	混合 时间(min)	吸磁 时间(sec)	等待 时间(min)	容积(μL)	混合速度(1~10)	温度(℃)	混合位置(0~100%)	混合幅度(1~100%)	吸磁位置(0~100%)	吸磁速度(1~10)
移磁珠	3	0.2	40	0	700	5	/	0	80	0	1
结合	1	12	80	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	2	30	0	700	8	/	0	80	0	1
清洗2	3	1.5	30	4	700	8	/	0	80	0	1
洗脱	6	8	80	0	100	8	65	0	80	0	1
弃磁珠	3	0.2	0	0	700	5	/	0	80	0	1

【注】：

1. 设置程序时，在“选项”一栏中选择“分9段磁吸”和“升温动作同步”。
2. 上述提取程序为推荐程序，用户可根据仪器品牌型号及自身需求进行相应调整，详情可咨询本公司技术人员。

HB221027