上海联迈 PAF蛋白；15kDa PCNA关联因子(PAF)重组蛋白

PAF蛋白；15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白

英文名称：Recombinant PCNA Associated Factor 15kDa (PAF)

p15(PAF); L5; OEATC1; NS5ATP9; Overexpressed In Anaplastic Thyroid Carcinoma 1; Hepatitis C virus NS5A-transactivated protein 9

来源：原核表达

宿主：E.coli

规格：10μg   50μg   200μg   1mg   5mg

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书

片段与标签：N-terminal His Tag

物种来源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种）相同的名称，不同的物种

性状：冻干粉

表达系统：    大肠杆菌

产品纯度：>97%

保存条件：如果样品在2-4周内使用，可以在4°C低温储存。 

长期储存，建议添加载体蛋白（0.1％HSA或BSA），并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。

PAF蛋白；15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白表达纯化：

联迈生物致力于为客户提供高纯度，低成本的活性重组蛋白，包括各类受体，细胞因子，生长因子，转录因子，激素、酶、蛋白、病毒抗原等，满足客户下游科研实验研究的需要。联迈生物拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验，完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。

PAF蛋白；15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白表达出来的蛋白比实际大小要小，这是为什么？

主要原因有如下几个方面

1.     蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶

2.     翻译起始位点的问题：如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游，降解就会有可能出现。解决的方法可以采用两端都带有融合标签的载体，例如pET系列部分载体在N-端和C-端都有His-Tag融合标签。这样，全长蛋白就可以通过提高咪唑浓度，在洗脱时将截短蛋白与全长蛋白区分开。或者在蛋白两端采用不同标签，进而通过亲和纯化的方式得到全长蛋白。

3.     影响蛋白稳定性的另外一个因素是与N端Met相邻的氨基酸，即N端原则，当下列氨基酸出现在N端时: Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期较短，蛋白会存在不稳定降解的问题，特别是Leu，当它出现在第二个位置上时，蛋白极度不稳定。在选择克隆位点时， Nco I 和Nde I都是 是一个比较好的N端的克隆位点选择，而使用NdeI的时候就要特别留意Leu的出现。

PAF蛋白；15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白如何提高蛋白的可溶性表达比例及表达量？

有些蛋白质表达水平低，或者表达的大多是包涵体，通常情况下通过基因优化，载体及菌株的筛选，表达条件优化，诱导条件优化等可以有效增加蛋白的可溶性比率及表达量。

1.     密码子优化

密码子优化是根据大肠对密码子的偏好性进行优化筛选，一般选择使用频率大于20%的密码子。经过优化的基因序列能提高mRNA二级结构的稳定性，避免因为不充足的tRNA库导致翻译延迟，成熟前翻译终止，翻译移码和氨基酸错配。

2.     降低蛋白表达速率

通过降低IPTG的诱导浓度，降低蛋白的表达速率。通过调节促使肽链聚集的速率与其折叠速率平衡，有利于提高蛋白的可溶性表达。

3.     温度

37度的表达条件往往会使一些蛋白形成包涵体，而30度的表达条件则可能产生可溶的或者有活性的蛋白。在某些条件下（12-20度）延长诱导时间（过夜）会使溶解性蛋白的产量达到大。

4.     细胞周质表达

我们可以选用一些将蛋白运输到细胞周质的载体。周质空间更有利于蛋白的正确折叠及二硫键的形成。常规选用的载体有pet22系列。但是我们要注意的是，有些蛋白并不适合于被运输到周质空间，比如一些与β-gal融合的周质的内部被证明是有毒的。