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探针法Candidatus Mycoplasma turicensis实时定量PCR试剂盒

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详细介绍

探针法Candidatus Mycoplasma turicensis实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma turicensis

 

货号:Mqt-tur-20      规格:20个反应

货号:Mqt-tur-50      规格:50个反应

货号:Mqt-tur-100     规格:100个反应

储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。

 

试剂盒特点:

1,  特异性检测Candidatus Mycoplasma turicensis,与其他生物基因组没有交叉反应。

2,  使用的DNA聚合酶具有抗抑inhibit制能力强和热稳定性好的特点;采用热启动方式,可抑inhibit制非特异性扩增,降低背景荧光。

3,  带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性。

4,  带有dUTP和UDG酶,可降低残留DNA的污染。

 

嗜血支原体可以感染很多哺乳动物,包括猫、犬、猪、牛、羊等,也包括人类。目前已知寄生于猫血中的支原体有三种:猫血支原体(Mycoplasma haemofelis),Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。这些细菌粘附在红细胞表面生长,也会给宿主造成一些疾病,尤其是在猫免疫力下降的时候。有报道约14%的贫血猫呈血液支原体阳性。Candidatus Mycoplasma turicensis寄生于猫红细胞表面,在上述三种支原体中致病能力中等,且常与另两种支原体合并感染,可引起温和到急性的溶血性贫血,与猫免疫缺陷病毒合并感染时,或者可的松类药物处理后,临床症状加重。

嗜血支原体无法在体外培养,因此难以开发蛋白类检测方法。常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低,实验误差大,无法区分支原体种类,易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰,且支原体易从红细胞表面脱落,造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势,且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比,不仅可以精确定量,而且操作更为方便,更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域,设计特异性引物和探针,可以准确识别Candidatus Mycoplasma turicensis,与其他生物基因组没有交叉反应。在236份猫血样品中,检测获得14个阳性,其中2个为Candidatus Mycoplasma turicensis单独感染,2个为与猫血支原体共感染,3个为与Candidatus Mycoplasma haemominutum共感染,以及7个三种嗜血支原体共感染。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探针、阳性对照品、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(Uracil- DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA-糖基酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌(Thermus thermophilus),经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑inhibit制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体,在室温下DNA聚合酶活性被抑inhibit制。在PCR循环的热变性阶段,抗体受热被去除,此时DNA聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP用于消除PCR扩增中的残余污染。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基,从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为模板继续扩增。UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活,对PCR反应没有影响。

 

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主要用途
探针法实时定量PCR检测Candidatus Mycoplasma turicensis
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