Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (1 U/μL)

使用方法

Hieff Canace^® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. 推荐反应体系

所有操作应于冰上进行，2×Canace^® Uracil+ PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20 °C保存。

表1. PCR扩增反应体系

【注】：

1) 模板：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率。

2) dNTPs：反应体系中dNTPs使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTPs中不含dUTP，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。

3) 聚合酶浓度：在50 μL体系中，推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化，请勿超过2 U。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

4) Mg²⁺终浓度：反应体系中Mg²⁺终浓度为2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨询，要求提供低Mg²⁺浓度或不含Mg²⁺的buffer。

2．推荐反应程序

表2. PCR扩增反应程序

【注】：

1)预变性温度推荐使用98°C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2) 退火温度推荐使用60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3) 延伸温度和时间：推荐使用72°C，延伸时间根据实际需要进行调整。

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