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FuniCut® FspI限制性内切酶(FspI酶切序列位点TGC/GCA)
- 品牌:翌圣生物
- 产地:
- 供应商报价:面议
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
更新时间:2024-12-24 09:03:45
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销售范围售全国
入驻年限第1年
营业执照已审核
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详细介绍
产品简介
FuniCut® 系列内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA 等。FuniCut® 系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
产品信息
货号
15036ES50
规格
50 T
识别位置
5'-TGC↓GCA-3'
3'-ACG↑CGT-5'
推荐反应条件
1×FuniCut® 缓冲液;最适37℃孵育
酶活
10 U/μL
失活条件
80°C孵育20 min
同裂酶
Acc16I, Avill, MstI, NsbI
组分信息
组分编号
组分名称
15036ES50
15036-A
FuniCut® FspI
50 μL
15036-B
10×FuniCut® Buffer
1 mL
15036-C
10×FuniCut® Color Buffer*
1 mL
*10×FuniCut® Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。FuniCut® Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
储存条件
-25~-15℃保存,有效期2年。
注意事项
- 3 h孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性。
- 受CpG甲基化影响,序列完全重叠,剪切阻断。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液(冰上操作)
组分
质粒DNA
PCR产物
基因组DNA
ddH2O
15 μL
16 μL
30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer
2 μL
3 μL*
5 μL
底物DNA
2 μL (~1 μg)
10 μL (~0.2 μg)
10 μL (5 μg)
FuniCut® FspI
1 μL
1 μL
5 μL
Total
20 μL
30 μL
50 μL
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FuniCut® Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。
2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3) 37℃孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR产物),或30~60 min(基因组DNA)。
4) 80°C温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
5) 如果使用FuniCut® Color Buffer进行酶切反应,得到的产物可直接上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
1) 每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应体系。
2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。
3. 质粒的扩大反应体系
组分
体积(20 μL)
体积(20 μL)
体积(50 μL)*
DNA
1 μg
2 μg
5 μg
FuniCut® FspI
1 μL
2 μL
5 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer
2 μL
2 μL
5 μL
Total
20 μL
20 μL
50 μL
*如果总反应体系大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。
4. 不同DNA中的识别位点数
λDNA
ΦX174
pBR322
pUC57
pUC18/19
SV40
M13mp18/19
Adeno2
15
1
4
2
2
2
1
1
5. 甲基化修饰影响
Dam
Dcm
CpG
EcoKI
EcoBI
无影响
无影响
序列完全重叠,剪切阻断
无影响
无影响
6. 不同反应缓冲液中的活性*
反应缓冲液
FuniCut® Buffer
Thermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart® Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性
100%
100%
100%
100%
*活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。
Ver.CN20231228
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