Celltracker CM-DiI 活细胞示踪剂CM-DiI(红色)

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 染色液制备

1）配置DMF，DMSO或EtOH 储存液：储存液用DMF、DMSO或EtOH配制浓度1-2 mM。

注：未使用的储存液保存在-20℃，分装保存，避免反复冻融。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或D-PBS）稀释储存液，配制浓度为1～2 μM的工作液。

注：最佳的工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整。

2. 细胞标记（悬浮细胞）

1）在标记前根据实验要求按照上述方法配制好工作液；

2）建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育≤5 min，再于4℃孵育15 min（低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性）。

【注】：细胞的染色时间依细胞类型的不同差异很大，一般细胞建议染色小于5 min；但有的细胞染色可能染色时间需要延长到20 min-1 h，最佳染色时间需要优化。

3）标记完成后，用PBS清洗细胞，并用新鲜培养基重悬细胞。

注：对于贴壁细胞，可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记，相较于消化处理后的细胞具有更高的活力。

2. 染色后处理

1）CM-DiI染色后的细胞直接用3.7% 甲醛（溶于PBS），于37℃固定10 min；

2）室温条件PBS清洗2次，每次5 min；

3）于-20℃中，用丙酮透化处理10 min；

4）室温条件PBS清洗2次，每次5 min；并根据自身的实验要求以及细胞类型，进行后续的实验如石蜡包埋-免疫组化分析，电镜分析等。有报道提到，经CM-DiI染色后的大鼠嗜铬细胞瘤细胞可兼容2%(w/v)多聚甲醛和0.2%(w/v) Triton X-100的透化作用；从绵羊淋巴细胞内再次纯化的CM-DiI标记细胞，经甲醛固定，石蜡包埋，切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇，以及脱水后仍能维持荧光；

HB221116