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植物DNA的提取问题

pengjie0713    2010-08-23    植物核酸提取    浏览 282 次

我是做细菌研究的,有个课题需要用到植物的DNA。可是提取出的DNA到用70%的乙醇洗涤三次之前那步时候没有发现絮状的DNA,而且液体的颜色很深。洗涤之后的沉淀物颜色也偏绿而不是透明的... 我是做细菌研究的,有个课题需要用到植物的DNA。 可是提取出的DNA到用70%的乙醇洗涤三次之前那步时候没有发现絮状的DNA,而且液体的颜色很深。 洗涤之后的沉淀物颜色也偏绿而不是透明的。请问是不是研磨不充分还是其他的什么原因?
还有研磨的时候必须用液氮么?可以用-70C下保存的新鲜叶片直接研磨么?

精彩问答
iypoctnm 发布日期:2010-08-24
中间似乎需要高速低温离心的,有些植物种类因为多糖等成分过多而导致离心无法去除,则需要添加一些可以降解多糖的(糖蛋白)的成分,我们做过的植物一般的草本的相对容易提取,木本的则混合物较多,难以提取的很纯。
全部评论
杨成功3 发布日期:2010-09-09
.DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为YZ组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时YZ了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ?80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,Z后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
背乡弃爱 发布日期:2010-08-24
具体问题如何?太不明确了!
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